[发明专利]角膜模型低温保存用固体培养基及制备方法和使用方法

摘要

本发明公开了一种角膜模型低温保存用固体培养基及制备方法和使用方法，所述固体培养基由基础培养基和琼脂糖水溶液按照1:1的体积比混合均匀后凝固制成；所述琼脂糖水溶液的质量浓度为0.5%～5%；所述基础培养基以DMEM培养液和F12培养液的混合溶液为基础液，添加胎牛血清、维甲酸、人表皮生长因子、胰岛素、氢化可的松、腺嘌呤、三碘甲状腺氨酸、谷氨酰胺和低温保护剂；所述低温保护剂为HEPES、蔗糖、甘氨酸、丙氨酸、腺苷、维生素E、维生素C、透明质酸和硫酸软骨素的混合物。本发明的固体培养基具有减少组织细胞低温缺氧损伤的优点，能够有效保证角膜模型测试结果的准确性，同时方便操作及长途运输。

主权项

一种角膜模型低温保存用固体培养基，其特征在于，所述固体培养基由基础培养基和琼脂糖水溶液按照1:1的体积比混合均匀后凝固制成；所述琼脂糖水溶液的质量浓度为0.5%～5%；所述基础培养基以DMEM培养液和F12培养液的混合溶液为基础液，添加胎牛血清、维甲酸、人表皮生长因子、胰岛素、氢化可的松、腺嘌呤、三碘甲状腺氨酸、谷氨酰胺和低温保护剂；所述DMEM培养液和F12培养液的混合溶液中DMEM培养液和F12培养液的体积比为3:（1～9），所述基础培养基中胎牛血清的体积百分含量为5%～20%，维甲酸的浓度为4μg/mL～10μg/mL，人表皮生长因子的浓度为0.1ng/mL～10.0ng/mL，胰岛素的浓度为5.0ng/mL～50.0ng/mL，氢化可的松的浓度为0.1μg/mL～10.0μg/mL，腺嘌呤的浓度为5.0μg/mL～50.0μg/mL，三碘甲状腺氨酸的浓度为0.1μg/mL～10.0μg/mL，谷氨酰胺的浓度为0.2g/L～20.0g/L；所述低温保护剂为HEPES、蔗糖、甘氨酸、丙氨酸、腺苷、维生素E、维生素C、透明质酸和硫酸软骨素的混合物，基础培养基中HEPES的浓度为1mmol/L～100mmol/L，蔗糖的浓度为0.1mmol/L～50mmol/L，甘氨酸的浓度为0.1mmol/L～100mmol/L，丙氨酸的浓度为0.1mmol/L～100mmol/L，腺苷的浓度为1mmol/L～200mmol/L，维生素E的浓度为0.01mmol/L～20mmol/L，维生素C的浓度为0.01mmol/L～20mmol/L，透明质酸的体积百分含量为0.1%～10%，硫酸软骨素的浓度为1g/L～100g/L。