[发明专利]一种检测沙门氏菌的方法

摘要

本发明提供了一种检测沙门氏菌的方法，本发明制备方法：合成DNA银纳米簇；Phi 29聚合酶和Nt.AlwI内切酶共同作用的指数放大与链置换循环放大的均相反应，后进行荧光检测。本发明利用了核酸适配体的特异型识别，将aptamer设计到发夹结构中实现了对目标物沙门氏菌的高特异性检测；利用Phi 29聚合酶和Nt.AlwI内切酶共同作用以及链置换反应，实现了Trigger的循环利用，起到了信号放大的作用，有效地提高了检测的灵敏度。

主权项

1.一种检测沙门氏菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）进行DNA银纳米簇的合成；（2）将目标菌加入到均相反应溶液中；（3）荧光仪检测荧光强度；所述的步骤（1）具体为： 将15 μL的100 μM H3和73μL的20 mM PB缓冲液加入到用锡箔纸包裹的EP管中，然后再加入6 μL的1.5 mM的AgNO₃溶液，震荡1 min，于4 ℃下放置30 min；30 min后，继续向EP管中加入 6 μL的1.5 mM的 NaBH₄，震荡1 min，于4 ℃下黑暗放置6 h以上即得；所述H3的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述的步骤（2）具体为： 将3 μL，20 μM H1、3 μL，5 μM Primer、0.5 U Phi 29聚合酶、5 μL dNTPs、0.5 U Nt.AlwI内切酶、9 μL，50 μM H2、5 μL血红素和9 μL，50 μM H3、10 μL 10×的缓冲液buffer和5 μL灭菌水加入到锡箔纸包裹的EP管中，再加入5 μL目标菌，混合均匀后，于37 ℃下水浴90 min;所述H1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Primer的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述H2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。