[发明专利]碳点/铜纳米簇复合物比率荧光多巴胺探针的制备方法

摘要

本发明属于纳米材料与生化传感的交叉技术领域，涉及一种碳点/铜纳米簇复合物比率荧光多巴胺探针的制备方法：首先制备蓝色荧光发射的碳点，对其表面进行氨基苯硼酸改性，再制备红色荧光发射的牛血清白蛋白稳定铜纳米簇，将二者混合反应制备出双荧光发射的碳点/铜纳米簇复合物，然后向碳点/铜纳米簇复合物水分散液中加入多巴胺，利用荧光光谱仪测定荧光发射光谱，拟合比率荧光峰强度与多巴胺共存浓度之间的线性关系，进而构建基于碳点/铜纳米簇复合物的比率荧光多巴胺探针；该探针的制备工艺简单，制备成本低，产品具有高灵敏性和高选择性，能够发展成为一种新颖的比率荧光探针应用于多巴胺的高效检测。

主权项

1.一种碳点/铜纳米簇复合物比率荧光多巴胺探针的制备方法，其特征在于具体包括以下步骤：(1)制备蓝色荧光发射的碳点：将0.1克柠檬酸钠与0.75克碳酸氢铵溶解于10毫升二次蒸馏水中，搅拌均匀形成均质混合水溶液，将其转移至高压反应釜中，在180℃下搅拌反应4小时，然后冷却至室温，采用分子量为1000道尔顿透析袋渗析处理24小时，透析袋中溶液采用旋转蒸发仪除水得到悬浊液，采用丙酮沉淀产物，离心分离，乙醇洗涤得到沉淀物，再干燥除水处理得到碳点；(2)碳点表面进行氨基苯硼酸改性：称取20毫克1‑(3‑二甲基氨丙基)‑3‑乙基碳二亚胺(EDC)盐酸钠，10毫克N‑羟基琥珀酰亚胺钠(NHS)和20毫克氨基苯硼酸溶于20毫升二次蒸馏水，混合均匀形成均质水溶液，充分搅拌1小时后，加入1毫克/毫升的碳点水分散液，在室温下继续搅拌反应2小时，反应产物采用离心分离除去未偶联的氨基苯硼酸，上层悬浊液用丙酮沉淀，离心分离，用乙醇反复洗涤得到沉淀物，然后干燥处理得到氨基苯硼酸改性的碳点；(3)制备牛血清白蛋白稳定的铜纳米簇：量取0.25毫升0.1摩/升的氯化铜水溶液与20毫升5毫克/毫升的牛血清白蛋白，在室温下充分搅拌10分钟形成均质混合液，然后滴加质量分数50％的0.5毫升氨水，继续搅拌反应5小时，反应产物用丙酮沉淀，离心分离，乙醇反复洗涤，在60℃下干燥得到牛血清白蛋白稳定的铜纳米簇；(4)碳点/铜纳米簇复合物的制备：在5毫升pH＝7.4物质的量浓度为1毫摩/升的磷酸盐水缓冲液中加入15毫克EDC盐酸纳和9毫克NHS，充分搅拌均匀后再加入10毫克牛血清白蛋白稳定的铜纳米簇，在室温下连续搅拌反应30分钟，然后滴加5毫升1毫克/毫升的碳点水分散液，保持连续搅拌反应8小时，反应产物用丙酮进行沉淀处理，沉淀物离心分离，乙醇重复洗涤，干燥处理得到碳点/铜纳米簇复合物；(5)在50毫升pH＝7.4物质的量浓度为1毫摩/升的磷酸盐水缓冲液中加入碳点/铜纳米簇复合物，其浓度调节至0.1毫克/毫升，在缓慢搅拌下加入多巴胺形成均质的混合体系，其中的多巴胺浓度调节为0.1‑100微摩/升，采用荧光光谱仪测定混合体系的荧光发射光谱，拟合比率荧光峰强度与相应多巴胺物质的量浓度之间的线性关系，进而构建出基于碳点/铜纳米簇复合物的比率荧光多巴胺探针。