[发明专利]人血浆中沙格列汀和5-羟基沙格列汀的LC-MS/MS高通量检测方法

摘要

本发明涉及一种人血浆中沙格列汀和5‑羟基沙格列汀的LC‑MS/MS高通量检测方法；本方法是取待测血浆样品混入内标溶液，内标溶液为乙腈：水(50:50，v/v)配制成的同位素标记物¹³CD₂‑沙格列汀和¹³CD₂‑5‑羟基沙格列汀浓度分别为5.00和10.0ng/mL的混合溶液，加入CHAPS水溶液后涡流并加热，再加入乙腈后涡流并离心，取上清液，氮气吹干后，加入复溶液进行复溶，复溶液为乙腈：水：甲酸体积比为95:5:0.1的混合液，得到待测样品，进行LC‑MS/MS分析；本发明的优点在于：该方法满足了临床大批量样品分析的需求，与现有技术相比具有操作简单、提取时间短、适合高通量样品预处理的特点。

主权项

1.一种人血浆中沙格列汀和5‑羟基沙格列汀的LC‑MS/MS高通量检测方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、血浆样品前处理：取待测血浆样品混入内标溶液，加入CHAPS水溶液后涡流并加热，再加入乙腈后涡流并离心，取上清液，氮气吹干后，加入复溶液进行复溶，得到待测样品；所述内标溶液为分别以乙腈以及体积比为50:50的乙腈和水溶解并定容配制成的同位素标记物¹³CD₂‑沙格列汀和¹³CD₂‑5‑羟基沙格列汀浓度均约为0.700mg/mL的内标贮备液；所述复溶液为乙腈：水：甲酸体积比为95:5:0.1的混合液；S2、采用LC‑MS/MS法测定待测样品中沙格列汀、5‑羟基沙格列汀、¹³CD₂‑沙格列汀和¹³CD₂‑5‑羟基沙格列汀的浓度：I.LC条件：HILIC亲水色谱柱：100mm×3.0m，3μm；柱温：40℃；进样体积：5μL；流动相A：含有0.2％甲酸的5mM醋酸铵水溶液；流动相B：乙腈，采用体积比为10：90的A相和B相进行等梯度洗脱；II.MS条件：离子源：大气压化学电离源APCI；雾化电流：3.0μA；离子源温度：500℃；CUR：30psi；扫描模式：正离子多反应监测+MRM；扫描范围：m/z 50～400；S3、标准曲线的绘制：称取沙格列汀和5‑羟基沙格列汀，沙格列汀以乙腈溶解并定容，5‑羟基沙格列汀以体积比为50:50的乙腈和水溶解并定容，配制成浓度约为1.00mg/mL的贮备液，以体积比为30:10的乙腈和水逐级稀释得到混合标准系列工作溶液，以人空白血浆稀释该工作溶液，制成标准液，以上述LC‑MS‑MS条件分别检测所述标准液，并根据检测结果绘制相应的沙格列汀和5‑羟基沙格列汀的标准曲线。