[发明专利]一种斑茅植物根尖分生区染色体标本的制备方法

摘要

本发明提出一种斑茅植物根尖分生区染色体标本的制备方法，该方法包括以下步骤根尖培养、根尖取样及前处理、根尖酶解、染色体制片和镜检等步骤，其特点是桶栽整株培养根系；根尖处理采用0.002M 8‑羟基喹啉水溶液25~28℃处理3~4小时，采用酶解去壁低渗法制片。本发明可操作性强，容易获得高活性分生区的根尖，节约根尖培养的时间，节省人力物力，制片效率高，得到分生区细胞的中期分裂相多，获得的染色体形态清晰、分散均匀，特别适合斑茅属植物的染色体制片，本方法同样适用于甘蔗及其近缘属植物的染色体制片。

主权项

一种斑茅植物根尖分生区染色体标本的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1） 根尖培养：初春，剪取斑茅幼嫩植株种植于培养桶内，培养桶的侧边及底部打孔透水，桶内底部为保水透气基质，通过正常的水、肥及除草等栽培管理，3~4个月后斑茅的根会盘绕于桶内的四周及底部；（2） 根尖取样及前处理：将整植株连同基质与培养桶分离，挑选活性高的根尖，用手术刀或手术剪取长度约为0.5cm的根尖，放置于蒸馏水中漂洗，漂洗后投入浓度为0.002M的8‑羟基喹啉水溶液、25~28℃处理3~4小时，处理后用蒸馏水洗净，再放置于卡诺氏固定液中、4℃冰箱处理24~48小时；（3）根尖酶解：从步骤（2）的冰箱中取出根尖，用蒸馏水漂洗2~3次，洗净固定液后，放置于0.075M KCl溶液低渗1小时，后取出根尖并放置于含有纤维素和果胶酶的酶解混合液中酶解5~8小时，酶解后用蒸馏水洗净后低渗1小时，转入卡诺氏固定液固定0.5小时；（4）染色体制片：用镊子和手术刀将步骤（3）的根尖分生区细胞解离出，并均匀涂抹于载玻片上，晾干。（5）镜检：将步骤（4）晾干的玻片放置于具有相差功能的显微镜镜检，选择染色体形态好、分散好的细胞，做好记录，‑80℃保存备用。