[发明专利]月季不定芽真空渗透转基因方法有效
| 申请号： | 201710263493.1 | 申请日： | 2017-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN106868042B | 公开（公告）日： | 2020-04-03 |
| 发明（设计）人： | 王长泉;刘金义;陆俊;任浩然;白梦娟 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/74 |
| 代理公司： | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 | 代理人： | 董建林;王玉 |
| 地址： | 210095 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种月季不定芽真空渗透转基因方法，包括以下步骤：切取月季无菌苗的幼嫩茎尖，在增殖培养基上诱导产生大量不定芽；切取不定芽在增殖培养基上预培养3天，然后转移到携带目的基因的农杆菌转化液中真空渗透5～10 min，充分浸湿；去除菌液后的不定芽转移到增殖培养基上在黑暗条件下共培养3天，然后把经无菌水彻底清洗后的不定芽转入抑菌培养基培养5天，再根据携带目的基因表达载体的选择标记转入到选择培养基上按由低到高梯度筛选，获得的抗性不定芽转移到生根培养基上诱导生根；采集阳性植株的叶片进行PCR鉴定和报告基因检测，都为阳性的植株为转基因植株。本发明增值系数高、繁殖周期短、基因转化率高、假阳性率低。 | ||
| 搜索关键词： | 月季 不定 真空 渗透 转基因 方法 | ||
【主权项】：
月季不定芽真空渗透转基因方法，其特征是，包括以下步骤：切取月季无菌苗的幼嫩茎尖，在增殖培养基上诱导产生大量不定芽；切取长度0.5～1.0cm、带2～4片小叶的不定芽在增殖培养基上预培养3天，然后转移到携带目的基因的农杆菌转化液中真空渗透5～10min，充分浸湿；去除菌液后的不定芽转移到增殖培养基上在黑暗条件下共培养3天，然后把经无菌水彻底清洗后的不定芽转入抑菌培养基培养5天，再根据携带目的基因表达载体的选择标记转入到选择培养基上按由低到高梯度筛选，获得的抗性不定芽转移到生根培养基上诱导生根；采集阳性植株的叶片进行PCR鉴定和报告基因检测，PCR鉴定和报告基因检测都为阳性的植株为转基因植株。
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