[发明专利]一种外源基因导入红腺忍冬的方法

摘要

本发明公开了一种外源基因导入红腺忍冬的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)实生幼苗的准备：挑取出经低温贮藏后的红腺忍冬浆果的种子，漂洗干净，浸泡，取出及时播种，获得实生幼苗；2)无菌瓶苗的准备：取实生幼苗无根植株洗净消毒，于生根培养基中进行培养，获得无菌瓶苗；3)农杆菌侵染：选取无菌瓶苗的叶柄于预培养基上进行预培养，农杆菌侵染后于共培养基上进行暗培养，接着于抑菌培养基上进行抑菌培养，诱导愈伤组织，获得侵染材料；4)转基因愈伤组织的筛选；5)转基因愈伤组织的氯酚红检测；6)转基因愈伤组织的PCR检测。本发明方法具有操作简单，培养周期短，转化率高，遗传性状稳定等优点。

主权项

一种外源基因导入红腺忍冬的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)实生幼苗的准备：挑取出经低温贮藏后的红腺忍冬成熟浆果的饱满的种子，使用自来水把种子漂洗干净后浸泡于种子浸泡液中，取出并沥干种子表面水分及时播种于育苗基质中，育苗基质表面均匀覆盖细沙，保持湿润，进行培养，获得实生幼苗；2)无菌瓶苗的准备：取实生幼苗无根植株作为外植体，刷洗干净其表面的灰尘杂质后使用自来水冲洗20～30min，沥干外植体表面水分后，用75％酒精和0.1％氯化汞水溶液分别浸泡进行表面灭菌，然后置于生根培养基中进行培养，获得无菌瓶苗；3)农杆菌侵染：选取生长健壮的无菌瓶苗的叶柄于预培养基上进行预培养，接着于含附有表达载体的农杆菌重悬液中侵染，于共培养基上进行暗培养，诱导愈伤组织，获得侵染材料；4)转基因愈伤组织的筛选：侵染材料于抑菌培养基中抑菌培养后转接入筛选培养基进行筛选培养，获得转基因愈伤组织；5)转基因愈伤组织的氯酚红检测：将转基因愈伤组织表面杂质清洗干净并稍微晾干表面水分后，使用氯酚红进行检测；6)转基因愈伤组织的PCR检测：将氯酚红检测为阳性的转基因愈伤组织进一步使用PCR方法进行检测。