[发明专利]一种基于PSP的适用于高通量测序中elRNA文库构建方法有效
| 申请号： | 201710232986.9 | 申请日： | 2017-04-11 |
| 公开（公告）号： | CN106939306B | 公开（公告）日： | 2019-05-24 |
| 发明（设计）人： | 曹振龙;冷小健;刘少卿;邢红兵 | 申请（专利权）人： | 江苏吉诺思美精准医学科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 徐冬涛;李晓峰 |
| 地址： | 210046 江苏省南京市经*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开一种基于PSP的适用于高通量测序中elRNA文库构建方法。包括以下步骤：(1)以elRNA为样品来源；(2)采用去除核糖体方法进行文库构建至PCR反应之前；(3)采用PSP文库富集技术进行两轮PCR扩增。在高通量测序中，随着该技术的发展，面临的样品问题越来越严重，在外泌体包裹的RNA中，尤其是外泌体大RNA(exosome large RNA，elRNA)，含量相当稀少。针对这种情况，本发明借助于PSP文库富集技术，形成一种适用于elRNA的文库构建方法。该方法操作流程简单，能够获得满足高通量测序所需的文库。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 psp 适用于 通量 测序中 elrna 文库 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于PSP的适用于高通量测序中elRNA文库构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）以elRNA为样品来源；（2）采用去除核糖体方法进行文库构建至PCR反应之前，该过程包括以下步骤：（Ⅰ）对外泌体Total RNA进行核糖体RNA去除；（Ⅱ）对步骤（Ⅰ）所得RNA进行高温、高盐打断；（Ⅲ）对步骤（Ⅱ）所得产物进行逆转录成双链cDNA，并进行纯化；（Ⅳ）对步骤（Ⅲ）所得产物进行末端修复、3`末端加A、加接头，并进行纯化；（3）采用PSP文库富集技术进行两轮PCR扩增；所述的PSP文库富集技术依次包括第一轮PCR扩增、片段分选或DNA纯化、第二轮PCR扩增三个步骤；所述第一轮PCR扩增的循环数为建库流程中建议循环数的一半，所述第二轮PCR扩增的循环数为建库流程中建议循环数的另一半。
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