[发明专利]一种维生素A脂肪酸酯合成用固定化脂肪酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种维生素A脂肪酸酯合成用固定化脂肪酶的制备方法，涉及生物酶催化剂技术领域，包括如下步骤(1)共固定剂的制备，(2)载体的制备，(3)活化载体的制备，(4)固定化脂肪酶的制备。本发明所制固定化脂肪酶能显著提高维生素A脂肪酸酯的收率，尤其将由维生素A醋酸酯制备维生素A棕榈酸酯的收率提高到94％以上，且经粗分离后的维生素A棕榈酸酯纯度达到99％以上。

主权项

一种维生素A脂肪酸酯合成用固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)共固定剂的制备：向泊洛沙姆中加入交联聚维酮和六羟甲基三聚氰胺六甲醚，并以5℃/min的升温速度升温至70‑75℃保温混合15min，然后加入阴离子聚丙烯酰胺和环氧大豆油，继续以5℃/min的升温速度升温至115‑120℃保温混合30min，所得混合物转入5‑10℃环境中密封静置1h，并再次以5℃/min的升温速度升温至110‑115℃保温混合30min，再加入50‑55℃水，充分混合后于50‑55℃保温静置1h，过滤，所得滤渣送入冷冻干燥机中，干燥后所得固体经超微粉碎机制成微粉，即得共固定剂；(2)载体的制备：向水中加入陶瓷微粉、羟丙基甲基纤维素和葡萄糖酸钠，以5℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合15min，过滤，所得滤渣水洗三次，并将滤渣加入滚筒式混合机中；同时将纳米二氧化钛和纳米胶粉加入乙醇中，以5℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合30min，所得混合液以喷雾方式均匀喷向滤渣表面，然后自然冷却至室温，所得固体于40‑45℃下真空干燥，最后于400‑450℃下焙烧2h，即得载体；(3)活化载体的制备：将上述所制载体和共固定剂于45‑50℃下充分混合，静置30min后加入水解聚马来酸酐，混合均匀，即得活化载体；(4)固定化脂肪酶的制备：将酵母类脂肪酶的水溶液按5000单位/克活化载体的比例与活化载体混合，于35℃下振荡24h，振荡过程中分3‑5次加入过氧化氢脲，最后离心，经室温晾干后即得固定化脂肪酶。