[发明专利]一种Cas蛋白特异结合靶标DNA、调控靶标基因转录的方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201710152120.7 | 申请日： | 2017-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN106978428A | 公开（公告）日： | 2017-07-25 |
| 发明（设计）人： | 成秋香 | 申请（专利权）人： | 上海吐露港生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/70 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 201899 上海市嘉定区*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明涉及一种Cas蛋白结合DNA的方法，尤其是能够方便、快速、高效地针对一个或者多个靶进行基因转录调控的方法、以及用于所述方法的试剂盒。确定基因组上的目标靶点，找到目标靶点左右区域内Cas蛋白(所述Cas蛋白为保留RNA酶活力、缺失DNA酶活力的Cas蛋白突变体)结合所需的PAM位点，针对所述PAM位点设计向导序列，确定所述Cas蛋白的同向重复序列，并构建转录所述同向重复序列与向导序列相连的crRNA序列的crRNA质粒；将Cas蛋白的编码基因与转录所述crRNA质粒在细胞内共表达，即可使Cas蛋白特异地结合到目标靶点。采用本发明的方法，可以抑制一个或多个靶标基因的转录，整个操作过程与CRISPR/dCas9相比，操作过程非常简单，且编辑效率与dCas9相当。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 cas 蛋白 特异 结合 靶标 dna 调控 基因 转录 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
一种Cas蛋白特异性结合靶标DNA的方法，其特征在于，步骤包括：确定基因组上的目标靶点或者靶标基因，在所述目标靶点或者靶标基因左右两侧找到结合Cas蛋白所需的PAM位点，针对所述PAM位点设计向导序列；确定所述Cas蛋白识别和结合所需的同向重复序列；将同向重复序列与所述向导序列连接形成crRNA序列，并构建转录所述crRNA序列的crRNA质粒；将所述Cas蛋白的编码基因与转录所述crRNA序列的crRNA质粒在细胞内共表达，即可使Cas蛋白特异地结合到靶标位点。
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