[发明专利]永生化原代绵羊肺细胞系的构建及其应用在审
| 申请号： | 201710088258.5 | 申请日： | 2017-02-17 |
| 公开（公告）号： | CN107384868A | 公开（公告）日： | 2017-11-24 |
| 发明（设计）人： | 刘光清;刘腾;朱杰;陈宗艳;李传峰 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院上海兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12R1/91 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司31236 | 代理人： | 郭国中,陈少凌 |
| 地址： | 200241 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种永生化原代绵羊肺细胞系的构建及其应用；所述构建包括以下步骤用Dispase‑胶原酶灌流法获得高活率的新鲜原代绵羊肺成纤维细胞，经过24h培养后，在浓度为5ug/ml的聚凝胺存在下，用浓缩纯化的含有hTERT基因的重组慢病毒的细胞上清液对原代绵羊肺成纤维细胞进行感染，1周后用2ug/ml的嘌呤霉素进行药物压力筛选，在含有浓度为5ug/ml的聚凝胺存在下，重复感染一次，一周后，用1ug/ml嘌呤霉素维持液培养直至单克隆出现并生长至2.0cm左右时，挑取单克隆的细胞扩大培养，获得能够传代的永生化绵羊肺成纤维细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 永生 化原代 绵羊 细胞系 构建 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种永生化原代绵羊肺细胞系的构建方法，其特征在于，以原代绵羊肺细胞作为宿主细胞，用含hTERT基因的重组慢病毒感染宿主细胞，经过筛选、传代、鉴定，即得。
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