[发明专利]一种无激素工业化培育铁皮石斛原球茎的方法

摘要

本发明涉及一种无激素工业化培育铁皮石斛原球茎的方法，属于无激素培养技术领域。其通过铁皮石斛播种、原球茎诱导、原球茎增殖和原球茎出品得到无激素工业化培育的铁皮石斛。本发明大大提高了原球茎的增殖倍率并提高了它的得干率，使铁皮石斛原球茎的工业化生产有了实际应用的价值。由于本发明采用无激素的生产方式，因此得到的产品符合相关检验要求，可以达到上市要求。

主权项

1.一种无激素工业化培育铁皮石斛原球茎的方法，其特征是步骤如下：（1）铁皮石斛播种：使用铁皮石斛成熟果荚作为原球茎的诱导原料，将铁皮石斛种子播种到无激素培养基G0上，种子平铺培养基平面；培养条件为温度20~28℃，光照2000~3000Lx，培养12~15天，得到膨大后的铁皮石斛种子；（2）原球茎诱导：将步骤（1）所得膨大后的铁皮石斛种子接种到液体培养基G1中，接种量为8~10克/200mL；放置在摇床上均匀振荡，振荡频率为80~110转/分钟，保持温度20~28℃，光照2000~3000Lx，培养15天继代一次，继代2~3次后，种子发育为原球茎；（3）原球茎增殖：a、将步骤（2）所得液体培养基G1中的原球茎转移到固体培养基G2中培养，接种量为8~10克/200mL；条件为温度20~28℃，光照2000~3000Lx，培育30~45天；b、将步骤a中所得固体培养基G2中的原球茎转接到液体培养基G3中培养，接种量为30~50克/600mL瓶；条件为温度保持20~28℃，光照2000~3000Lx，摇床转速为80~100转/分钟；30~45天后继代一次；（4）原球茎出品：将步骤（3）所得液体培养基G3中的原球茎接种至出品前的无激素培养基G4中，接种量为8~10克/200mL；30天后转接至容积为18L的气室桶中，桶内装有14L液体培养基G5，接种量为1200~1500克/桶，培养期间持续向桶内充入洁净空气，充气量为0.2~0.25立方米/小时；培养30天后至满瓶，可直接得到无激素铁皮石斛原球茎产品；步骤（1）所述无激素培养基G0具体组分为1/2MS培养基+90~110g/L土豆+20g/L蔗糖+5~6g/L卡拉胶/琼脂，pH6.0；步骤（2）所述液体培养基G1为1/2MS培养基+0.2~0.5mg/L 6-BA+10g/L香蕉+20~25g/L蔗糖，pH6.2；步骤（3）所述固体培养基G2为：1/2MS培养基+0.2~0.5mg/L 6-BA+0.20~0.3g/L蛋白胨+100g/L土豆+20~25g/L蔗糖+5~6g/L卡拉胶/琼脂，pH6.2；液体培养基G3配方为1/2MS培养基+0.20~0.3g/L蛋白胨+100g/L土豆+20~25g/L蔗糖，pH6.2；步骤（4）所述无激素培养基G4为1/2MS培养基+0.20~0.3g/L蛋白胨+100g/L土豆+20~25g/L蔗糖+5~6g/L卡拉胶/琼脂，pH6.2；所述液体培养基G5配方为1/2MS培养基+0.25~0.3g/L蛋白胨+100g/L土豆+25g/L蔗糖，pH6.2。