[发明专利]一种微量植株水溶物化感潜力评价生物测定方法

摘要

一种微量植株水溶物化感潜力评价生物测定方法，用20‑30天的供体植物的地上部分，表面消毒后剪成1‑2cm，于灭菌水4℃浸提24小时，滤膜过滤灭菌，获得植株水浸提液；对受体植物种子相同消毒后播种在含6％的琼脂的培养皿中，根部向下垂直培养至根长0.5‑1cm时，加入供体植物水浸提液5‑10ul，于培养室内25℃或28℃、12小时光/暗继续培养2‑3天后取出测量生长量，与未受供体植物影响的受体植物的生长量作为对照，计算植物根系分泌物对受体植物生长的影响情况进行化感潜力评价。特色是只需要很少的供体植物来提取水溶性物质，并且不需要调节渗透压，同时既能反应植株水溶性物质的生物活性，又最大限度控制微生物干扰，是一种简便、快速、经济、准确的生物测定方法。

主权项

一种微量植株水溶物化感潜力评价生物测定方法，其特征在于改进后的微量植株水溶物化感潜力评价生物测定方法，具体步骤如下:(1)培养基制备用水配制以质量分数计的浓度为≥6％的琼脂液，将配制好的琼脂液在120℃、0.1MPa灭菌20min倒入圆形和方形培养皿中待用；(2)供体植物A的培养及水浸提液准备所述的供体植物A种子充分吸水后放在培养皿并置于25℃或28℃的培养室中催芽48小时，然后播种于装入土壤的小盆中，并置于25℃或28℃、12小时光/暗条件的温室种植20‑30天，剪取地上部分，用质量分数为3‑6％次氯酸钠进行表面消毒5min，然后用无菌水清洗2‑3次至无味，用灭菌的吸水纸吸出多余水分，将供体植物A用剪刀剪成1‑2cm长的小段，放入无菌容器内，按供体植物A与灭菌水的质量体积比＝1:5‑10加入灭菌水封盖，4℃摇床提取24小时，用注射器吸取浸提液，采用0.2μm灭菌过滤膜过滤获得20％‑10％的无菌植株水浸提液，4℃冰箱保存备用；(3)受体植物B的种子表面消毒和萌发所述的受体植物B的种子表面消毒是用质量分数为3‑6％次氯酸钠对受体植物B进行种子表面消毒10min，然后用无菌水清洗2‑3次至无味，然后将受体植物B播种于上述1准备的圆形培养皿的培养基中、无菌条件萌发至露白备用；(4)受体植物B的播种与培养在上述步骤1中的方形培养皿背面的中部用直尺划线，将步骤3中萌发至露白的受体植物B播种至培养皿中，按培养皿背部所划线整齐播种，每皿15‑20粒，封盖后将该培养皿放置在25℃或28℃的培养室内，12小时光/暗培养3‑5天，根部向下垂直培养，根生长至0.5‑1cm长度最佳，剔除生长不好的植株，每一培养皿中保留10‑15株；(5)受体植物B的生长量测定值在上述步骤(2)制备的植株水浸提液中，加无菌水稀释配置成体积百分百比为20％、10％、5％、2.5％浓度的浸提液，用微量移液器取浸提液处理上述步骤4中受体植物B的根尖部分，每植株5‑10ul，待处理部位表明无液体则培养皿再次封盖放回培养室培养2‑3天，测量受体植物B的主根长度，并以受体植物B的生长量测定值作为生长影响评价的参数；(6)对照处理将上述步骤(4)受体植物B的根尖采用无菌水代替植株水浸提液处理，处理方法、培养条件和时间同上述步骤(5)所述；从培养皿中取出受体植物B测量主根长度，并以对照的生长量测定值作为生长影响评价的参数；(7)植物浸提液化感潜力的计算植物浸提液化感潜力的计算公式为IR＝(1‑Tr/ck)×100，其中Tr表示受体植物B的生长量测定值，ck表示对照植物的生长量测定值，IR表示供体植物A对受体植物B的影响作用，当IR＜0时，表示供体植物A对受体植物B的作用为刺激生长；当IR＞0时，表示供体植物A对受体植物B具有抑制作用；当IR＝0时，表示供体植物A对受体植物B没有活性或表示两种植物间无化感作用存在。