[发明专利]增强鲁米诺体系的电化学发光生物传感器的制备方法

摘要

增强鲁米诺体系的电化学发光生物传感器的制备方法，属于生物传感器制备领域。本发明步骤1)确定待检测的目标miRNA，并根据序列遵循碱基互补原则设计DNA探针序列；2)通过电化学循环伏安法，在玻碳电极表面电沉积金纳米颗粒，并将设计的DNA探针(5’端修饰巯基)通过金硫键连接到金纳米颗粒上；3)使用葡萄糖氧化酶封闭电极表面的非特异性结合位点；4)将目标miRNA与封闭后的电极反应，与DNA探针杂交后形成双链复合物；5)在杂交后的电极上滴加血红素溶液，该物质只嵌入miRNA‑DNA双链之间，可有效加速过氧化氢的分解并生成超氧阴离子，从机理本质上实现电化学发光的增强。本发明解决了鲁米诺体系发光信号弱，生物传感器检测灵敏度低的问题。

主权项

增强鲁米诺体系的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)确定待检测的目标miRNA，设计与其碱基互补的DNA探针序列；2)玻碳电极的预处理：打磨玻碳电极，超声清洗，氮气吹干后将电极浸入5mM氯金酸溶液中，通过循环伏安法，初始电压和低电位设置为0V，高电位为1V，在此区间内循环扫描电沉积金纳米颗粒；3)将DNA探针溶液滴加在电极表面，室温下于湿盒中自组装16‑20h，带有巯基修饰的探针通过Au‑S键固定到金纳米颗粒表面；4)滴加葡萄糖氧化酶封闭电极表面非特异性活性位点，于4℃下培育3h；5)将目标miRNA滴加到电极表面，室温下杂交30min，形成miRNA‑DNA双链结构；6)将血红素溶液滴加到杂交后的电极表面，室温下培育1h。