[发明专利]嗜热菌株合成长链二元酸的应用方法

摘要

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及嗜热菌株合成长链二元酸的应用方法。以正十二烷作为唯一碳源，分别在30℃、37℃、45℃条件下培养筛选出能够在高温条件下，利用烷烃类碳源，合成长链二元酸的新菌株——食树脂假单胞菌及类产碱假单胞菌。将筛选出的产酸菌株接入种子培养基中，分别在30℃、37℃、45℃下培养，最后进行十二烷二元酸浓度的检测。

主权项

嗜热微生物合成制备长链二元酸的方法，包括嗜热微生物筛选、分离及鉴定、制备长链二元酸的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)采集的土壤样本则直接采用稀释涂布法在正十二烷选择培养基上进行涂布，于30℃、37℃和45℃水浴中培养3～5天。根据菌落的形态选择有差别的单菌落接种到对应的液体培养基中，同样温度下水浴摇床培养3～5天；(2)选择能够在正十二烷选择培养基即以烷烃作为唯一碳源的培养基上能够生长的菌株，在含有甲基红指示剂的指示培养基上进行划线培养；(3)同时，挑取选择培养基上能够生长的单菌落，接种于不添加甲基红指示剂的50mL指示培养基中，分别在30℃、37℃、45℃条件下进行摇瓶培养，并在培养的第一天起，每天取出1mL培养液，并滴加1～2滴甲基红指示剂，记录培养4天培养过程中的颜色变化情况；(4)挑选滴入指示剂后发生颜色变化明显的菌株，进行后续发酵、生理生化及分子鉴定实验，最终确定两株菌株分别为食树脂假单胞菌及类产碱假单胞菌；(5)将筛选出的产酸菌株接入50mL种子培养基中，分别在30℃、37℃、45℃下培养48h；(6)36h扩大培养过后，加入15％已灭菌的正十二烷，进入产酸期；产酸期持续4天，每隔12h或24h调整pH为7.5；(7)取经离心、过滤后的发酵清液30mL，分别将15mL加入到2支15mL离心管中，并通过滴定法和分光光度法两种方法进行十二烷二元酸浓度的检测。