[发明专利]一种融合蛋白表达纯化方法在审
| 申请号： | 201710020569.8 | 申请日： | 2017-01-12 |
| 公开（公告）号： | CN106636163A | 公开（公告）日： | 2017-05-10 |
| 发明（设计）人： | 淦志兵 | 申请（专利权）人： | 上海柏根生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12P21/02;C07K19/00;C07K1/22 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201108 上海市闵行*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种融合蛋白表达纯化方法，包括以下实验用品1ul重组的pET32a质粒、BL21(DE3)菌株、100ug/ml氨苄青霉素、0.5mM的IPTG、PBS缓冲液、220rpm、2M尿素、50mMTris、300mMNaCl、1mMDTT、溶菌酶、0.2%TritonX‑100、5mL NI‑NTA、EK酶、镍琼脂糖亲和层析和SK3071 非干扰型蛋白浓度测定试剂盒，包括以下实验过程融合蛋白的原核表达、融合蛋白的纯化和分析纯化后融合蛋白。本融合蛋白表达纯化方法，将(500mM咪唑)含目标蛋白洗脱液透析到1M尿素，4℃透析过夜，将透析过夜的样品加入EK酶，酶切后的蛋白过镍琼脂糖亲和层析，去除标签和EK酶，通过SDS‑PAGE电泳和灰度分析，检测分析纯化后融合蛋白的纯度，使其相比较非融合型表达载体具有表达量高、外源蛋白分离纯化简单、回收率高、分离纯化工艺简便和成本低的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 融合 蛋白 表达 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种融合蛋白表达纯化方法，其特征在于，包括以下实验用品：1ul重组的pET32a质粒、BL21(DE3)菌株、100ug/ml氨苄青霉素、0.5mM的IPTG、PBS缓冲液、220rpm、2M尿素、50mMTris、300mMNaCl、1mMDTT、溶菌酶、0.2%TritonX‑100、5mL NI‑NTA、EK酶、镍琼脂糖亲和层析和SK3071 非干扰型蛋白浓度测定试剂盒。
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