[发明专利]CHO细胞表达的重组牛病毒性腹泻病毒E2蛋白及亚单位疫苗的制备方法和应用有效
| 申请号： | 201611208261.8 | 申请日： | 2016-12-23 |
| 公开（公告）号： | CN107973841B | 公开（公告）日： | 2022-03-25 |
| 发明（设计）人： | 钱泓;吴有强;卞广林;张强;吴素芳;车影;宋月鸿;吕洋萍;陈滨;查银河 | 申请（专利权）人： | 浙江海隆生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/18 | 分类号： | C07K14/18;C12N15/40;C12N15/85;A61K39/12;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京乾诚五洲知识产权代理有限责任公司 11042 | 代理人： | 付晓青;李广文 |
| 地址： | 312000 浙江省绍兴市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种CHO细胞表达的重组牛病毒性腹泻病毒E2蛋白及亚单位疫苗的制备方法和应用，属于动物疫苗与兽用生物制品技术领域。其目的在于提供一种可大规模工业化生产牛病毒性腹泻病毒重组亚单位疫苗的制备方法。本发明提供的重组亚单位疫苗制备方法包括以下步骤：1)克隆包含E2蛋白编码基因的真核表达载体；2)转染CHO细胞，通过选择、筛选和驯化的方式得到悬浮稳定高效表达E2蛋白的CHO细胞株；3)发酵培养2)中所述的细胞株，纯化后得到重组E2蛋白；4)将重组E2蛋白与ISA 201 VG充分混匀得到重组亚单位疫苗。本发明提供的方法能够从细胞培养上清中收获目的蛋白，且产量高达500mg/L，不仅缩短蛋白纯化时间和简化疫苗生产步骤，也大大降低疫苗生产成本。 | ||
| 搜索关键词： | cho 细胞 表达 重组 病毒性 腹泻 病毒 e2 蛋白 单位 疫苗 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种重组牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：1)将牛病毒性腹泻病毒E2蛋白基因克隆到真核表达载体中得到含有牛病毒性腹泻病毒E2蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有牛病毒性腹泻病毒E2蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述CHO细胞株得到高度表达的细胞株；4)发酵培养3)中所述细胞株，纯化后得到重组牛病毒性腹泻病毒E2蛋白。
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