[发明专利]一种透明质酸酶的固定化方法

摘要

本发明公开了一种透明质酸酶的固定化方法，属于酶工程领域。本发明联合使用β‑环糊精、壳聚糖、TPP，对透明质酸酶进行包埋固定化，大幅度地提高了透明质酸酶的热稳定性，相比较于游离粗酶液在55℃下28min的半衰期，固定化酶在55℃下的半衰期提高到191min；并且固定化酶在重复使用11次后仍然保留了30％的初始酶活。本发明所得固定化透明质酸酶在工业化酶法生产透明质酸中有良好应用前景。

主权项

一种固定化透明质酸酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)向酶活为10000～15000U/mL的透明质酸酶的酶液中，添加β‑环糊精，β‑环糊精的添加量为透明质酸酶的酶液的质量的0.5％，搅拌均匀后，在室温下静置0.5～1h；(2)向步骤(1)所得溶液中添加壳聚糖溶液，搅拌均匀后，在室温下静置1～2h；壳聚糖溶液与透明质酸酶的酶液的质量比例为(3～4)：1，所述壳聚糖溶液是将粘度700cps、脱乙酰度95％以上的壳聚糖用体积浓度为0.05％的乙酸水溶液溶解，配成质量浓度为3～4％壳聚糖溶液；(3)将TPP水溶液在400r/min的搅拌速度下，以1mL/min的滴加速度加入到步骤(2)所得溶液中，形成固定化酶的分散体系；在4℃条件下静置1h；所述TPP的用量为壳聚糖质量的8～10％；所述TPP水溶液为质量浓度为5mg/mL的TPP水溶液；(4)离心收集固定化酶的颗粒，经真空低温干燥即可获得固定化透明质酸酶。