[发明专利]一种杜仲组织培养方法

摘要

本发明公开了一种杜仲组织培养方法，涉及杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)通过植物组织培养技术短时间内快速获得大量杜仲优良品种苗木的方法。本发明以杜仲带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了杜仲的离体再生，为其大量选育、快速繁殖、新品种推广提供技术支持。

主权项

一种杜仲组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：(1)芽诱导培养：以华仲5号杜仲带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成3.0～5.0长的带有2～3个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡5～10min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗1～3h后置于超净工作台中，先用75％乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1％升汞溶液消毒10～25min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度1500～2000lx条件下培养30天，统计其芽诱导率及生长情况；(2)增殖培养：将步骤(1)培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1000～2000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养30天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，得到丛生芽；(3)生根培养：将步骤(1)或(2)过程获得的高度约为2.5～3.5cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照11～12小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养1个月后统计生根情况；(4)炼苗移栽：将步骤(3)获得的高约6～8cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝3:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽大田。