[发明专利]用反向层析法回收凝胶电泳后的寡核苷酸的方法

摘要

本发明公开的用反向层析法回收凝胶电泳后的寡核苷酸的方法，其包括如下步骤(1)活化C18板；(2)上样过柱；(3)水洗；(4)收集寡核苷酸。本发明基于C18粉对寡核苷酸的特异吸附功能，将其填充于96孔滤板中，制成C18板，进行批量操作。本发明可以解决乙醇沉淀法纯度偏低问题，C18柱反相层析法操作耗时长问题。

主权项

用反向层析法回收凝胶电泳后的寡核苷酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)活化C18板(1.1)将浸泡在50％分析甲醇溶液中的C18板取出，往C18板孔内加满80％甲醇，打开真空泵，待孔内甲醇都抽干后，再加满、抽干；如此反复4次；最后将C18板内液体完全抽干；(1.2)往C18板孔内加满0.5mol/lL NaCl，真空抽干，反复3次；最后抽干；(2)上样过柱首先在已经准备好的C18板上贴上对应待过柱轮次编号的标签，放置在一块96孔母液板上，然后将凝胶后的泡胶液转移到C18板孔中。转移好后，将C18板和母液板一起，在电子秤上平衡后，一起放入离心机进行离心，转速从300r/min递增，至母液全部通过C18板即可；(3)水洗往C18板孔内加满超纯水，真空抽干，反复加满抽干12次以上，最后真空抽干；(4)收集寡核苷酸：取一块干净的48孔板，在上面写上对应的编号，一一对应地放在水洗过的C18板下面，用移液枪往C18板孔内加400ul33.3％乙腈，静置2分钟。平衡后放入离心机离心，转速从300r/min开始递增，直至C18板孔内液体全部离心到洗脱板中。