[发明专利]一种楸树胚性细胞悬浮系的建立方法

摘要

本发明属于细胞培养技术领域，涉及一种楸树胚性细胞悬浮培养的方法。其中包含以楸树未成熟果实的种胚作为外植体，依次经过胚性愈伤组织诱导、初级悬浮培养产物诱导、胚性细胞悬浮系的建立、植株再生过程。所述初级悬浮培养产物诱导培养基为1/2MS；所述楸树胚性细胞悬浮体系培养液是在1/2MS培养基上添加了聚乙二醇（PEG）6000。本发明方法可建立稳定的楸树胚性细胞悬浮系，且体胚再生植株成苗率高，出苗整齐无畸形。本发明可为楸树体胚发育、体细胞杂交、遗传转化及植物种质资源保存研究提供稳定的材料来源和平台，为基于悬浮细胞培养的生物反应器技术进行产业化繁殖提供重要理论和实验依据。

主权项

1.一种楸树胚性细胞悬浮系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：1）外植体灭菌及楸树胚性愈伤组织的获得：取楸树未成熟的种子，经灭菌后，剥取幼嫩种胚作为外植体，将所述的外植体诱导，获得胚性愈伤组织；2）初级悬浮培养产物诱导：将步骤1）获得的胚性愈伤组织转接到初级培养液中进行培养，得到楸树初级悬浮培养产物；3）胚性细胞悬浮培养筛选：将步骤3）获得的初级悬浮培养增殖产物过细胞筛后转接于胚性细胞悬浮培养液中培养，得到胚性细胞悬浮体系；完成楸树胚性细胞悬浮系的建立；所述步骤2）初级培养液为1/2MS液体基本培养基；所述步骤2）培养条件为转速100~120 r/min，培养温度23~27 ℃，光照强度900~1100Lx，光照时间14~16h/d的条件下培养，继代培养周期为16‑20天，继代培养2次，继代培养时用60目、80目的细胞筛过筛处理，过筛后液体静置1h后弃上清液，补入等量新鲜培养基，并将筛上的细胞团接入新鲜液体培养基中继续培养；所述步骤3）培养条件为转速100~120 r/min，培养温度23~27 ℃，光照强度900~1100Lx，光照时间14~16h/d的条件培养，继代培养周期16‑20天，继代培养是过60目细胞筛处理；所述步骤3）胚性细胞悬浮培养筛选培养液为1/2MS添加了聚乙二醇6000，所述培养液中聚乙二醇6000质量浓度为5%‑20%。