[发明专利]一种蝴蝶兰脱毒及快繁技术

摘要

本发明涉及蝴蝶兰种苗繁育技术领域，具体涉及一种蝴蝶兰脱毒快繁方法。本发明通过摸索初代培养，茎尖伸长培养，脱毒培养，壮苗、生根培养，获得一套利用物理方法结合化学试剂进行二次蝴蝶兰脱毒的方法及快繁途径。创新点在于摸索出茎尖伸长培养的方法、生长点切取大小结合化学试剂提高成活率及脱毒率、二次脱毒提高脱毒率的方法，建立了蝴蝶兰脱毒及快繁途径。该方法具有成活率、脱毒率高的优点，成活率达80.13％，脱毒率达92.67％，具有很好的技术效果和推广前景。

主权项

1.一种蝴蝶兰脱毒及快繁技术，其特征在于，它包括以下几个步骤：1)材料的选择及初代培养：选用生长健壮、开花3‑5朵、经检测后携带病毒的蝴蝶兰开花株，切取花梗，3‑5cm一节，每节包含1‑2个饱满腋芽，在超净工作台上用75％的酒精表面消毒30‑40s，再用0.1％的HgCl2震荡消毒8‑10min，无菌水冲洗3‑5次，用尖头镊剥去腋芽苞叶，再用0.1％的HgCl2震荡消毒2‑3min，用无菌水冲洗5‑8次，切除受HgCl2毒害的两端，接种于50mL诱导培养基上先暗培养7‑10天，后转入光照培养2‑3个月，待两片真叶展开形成丛生芽；所述的诱导培养基为1/3MS+6‑BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0‑6.5g/L，pH5.4‑5.8；2)茎尖伸长培养：将步骤1)所诱导出的展叶的丛生芽转入50ml促茎尖伸长培养基，培养40‑60天，待第三片或第四片叶成熟，得幼苗；促茎尖伸长培养基为：1/3MS+GA31～2mg/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0～6.5g/L，pH5.4～5.8；3)第一次脱毒培养：将步骤2)获得的幼苗，置于10X的冷光源解剖镜下用解剖针剥取一个微凸、穹形、发亮的生长点，迅速切下置于30mL脱毒培养基表面，进行暗培养7‑15天后转入光培养2‑3个月，中间进行1‑2次转接，防褐化死亡，每瓶培养基接种3‑5个含生长点的茎尖，茎尖切取大小为1‑2mm，留取1个叶原基；步骤3)所述的脱毒培养基为：1/3MS+6‑BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+5％氨基寡糖素0.2‑0.3mL/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0‑6.5g/L，pH5.4～5.8；4)第二次脱毒培养：将步骤3)获得的脱毒茎尖，待其长出1或2片成熟小叶后，进行二次脱毒培养，10X冷光源解剖镜下剥取1‑2mm大小生长点后，迅速接于30mL脱毒培养基表面，每瓶培养基接种3‑5个含生长点的茎尖，进行暗培养7‑15天后转入光照培养2‑3个月，每月进行一次转接，更换培养基，防止褐化死亡；步骤4)所述的脱毒培养基为：1/3MS+6‑BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+5％氨基寡糖素0.2mL/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0‑6.5g/L，pH5.4～5.8；5)脱毒苗的增殖培养：将步骤4)获得的脱毒苗，检测后进行增殖培养，切除叶片及褐化部分接于盛有100mL培养基的兰花瓶，每瓶接种5株；培养2‑3个月后，生长健壮，增殖系数达2‑4，即得脱毒分化苗；增殖培养基为：1/3MS+6‑BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+腺嘌呤3‑5mg/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0‑6.5g/L，pH5.4～5.8；6)脱毒苗的壮苗培养：待步骤5)获得的脱毒分化苗长至株高2‑3cm，两叶一心后转入盛有120mL壮苗培养基的兰花瓶后进行壮苗培养，每瓶转接16株；培养45‑60天后，株高达3‑5cm，两叶一心壮苗完成；所述的壮苗培养基为：1/2MS+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0‑6.5g/L，pH5.4～5.8；7)脱毒苗的生根培养：将步骤6)获得的壮苗后植株，接于150mL生根培养基的兰花瓶中进行生根培养，每瓶转接11‑13株；培养3‑4个月后，待植株长至3‑4片叶，根系达3条以上，健壮有活力，即移入温室驯化移栽；所述的生根培养基：1/2MS+NAA1.0mg/L+香蕉30g/L+土豆40g/L+蔗糖20g/L+琼脂6.0‑6.5g/L，pH5.4～5.8。