[发明专利]一种测定血清中维生素B1的同位素稀释超高效液相色谱质谱联用方法

摘要

本发明公开了一种测定血清中维生素B1的同位素稀释超高效液相色谱质谱联用方法，包括如下步骤：(1)维生素B1对照品溶液和维生素B1同位素内标溶液配制；(2)建立维生素B1标准曲线；(3)采集血清样品溶液的色谱图；(4)血清样品中维生素B1浓度的确定；(5)采集质控样品和加标回收率样品溶液的色谱图；(6)加标回收率计算。本发明的一种测定血清中维生素B1的同位素稀释超高效液相色谱质谱联用方法用于血清中维生素B1的测定中，简单快速、准确度高、专属性强、精密度高、灵敏度好。

主权项

1.一种测定血清中维生素B1的同位素稀释超高效液相色谱质谱联用方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)维生素B1对照品溶液和维生素B1同位素内标溶液配制：用体积分数为50％的甲醇水溶液分别溶解维生素B1和维生素B1同位素内标，制成已知浓度的维生素B1对照品存储液和已知浓度的维生素B1同位素内标存储液；用体积分数为50％的甲醇水溶液将已知浓度的维生素B1对照品存储液分别稀释成一系列具有不同已知浓度的维生素B1对照品溶液；用甲醇将已知浓度的维生素B1同位素内标存储液稀释成已知浓度的维生素B1同位素内标溶液；(2)建立维生素B1标准曲线：分别吸取一系列具有不同已知浓度的维生素B1对照品溶液体积V1，加入1～5倍体积V1的维生素B1同位素内标溶液，涡旋混匀，离心，取上清液体积V2加入1～3倍体积V2的蒸馏水，涡旋混匀，得到一系列具有不同已知浓度的维生素B1标准曲线工作液；在相同的预设超高效液相色谱质谱条件下，将体积V3的一系列具有不同已知浓度的维生素B1标准曲线工作液分别注入超高效液相色谱质谱联用仪中，获得一系列具有不同已知浓度的维生素B1标准曲线工作液的色谱图；以维生素B1标准曲线工作液的色谱图中维生素B1色谱峰峰面积与维生素B1同位素内标色谱峰峰面积的比值为纵坐标或横坐标，以相应的维生素B1标准曲线工作液的维生素B1浓度为横坐标或纵坐标，建立维生素B1标准曲线；所述预设超高效液相色谱质谱条件包括：超高效液相色谱条件：色谱柱：采用极性基团包埋C18键合硅胶的固定相；流动相：盐水溶液‑乙腈；流动相的流速：0.3～0.5mL/min；柱温：30～50℃；进样量：2～10μL；质谱条件包括：离子源：电喷雾离子源；扫描模式：正离子模式；检测模式：多反应监测；毛细管电压：5500V；离子源温度：550℃；离子源雾化气：40psi；离子源加热辅助气：60psi；气帘气：30psi；碰撞气：4psi；(3)采集血清样品溶液的色谱图：吸取血清样品体积V1，加入1～5倍体积V1的维生素B1同位素内标溶液，涡旋混匀，离心，取上清液体积V2加入1～3倍体积V2的蒸馏水，涡旋混匀，得血清样品溶液；在与(2)步骤中相同的预设超高效液相色谱质谱条件下，取体积V3的血清样品溶液注入超高效液相色谱质谱联用仪中，获得血清样品溶液的色谱图；(4)血清样品中维生素B1浓度的确定：将血清样品溶液色谱图中维生素B1色谱峰峰面积与维生素B1同位素内标色谱峰峰面积的比值带入已建立的维生素B1标准曲线，计算出血清样品中维生素B1的浓度；(5)采集质控样品和加标回收率样品溶液的色谱图：吸取血清样品体积0.8V1，加入0.2V1不同已知浓度的维生素B1对照品溶液，加入1～5倍体积V1的维生素B1同位素内标溶液，涡旋混匀，离心，取上清液体积V2加入1～3倍体积V2的蒸馏水，涡旋混匀，得到不同浓度的质控样品和加标回收率样品溶液；在与(2)步骤中相同的预设超高效液相色谱质谱条件下，取体积V3的质控样品和加标回收率样品溶液注入超高效液相色谱质谱联用仪中，获得质控样品和加标回收率样品溶液的色谱图；将质控样品和加标回收率样品溶液色谱图中维生素B1色谱峰峰面积与维生素B1同位素内标色谱峰峰面积的比值带入已建立的维生素B1标准曲线，计算出质控样品和加标回收率样品中维生素B1的浓度；(6)加标回收率计算：回收率％＝(测得浓度‑血清平均浓度×0.8)/加标浓度×0.2×100％。