[发明专利]运动场用结缕草组织培养快速繁殖的方法

摘要

本发明公开了一种运动场用结缕草组织培养快速繁殖的方法，属于生物技术领域。本方法包括下列步骤：①外植体选取与消毒；②改良培养基的配备；③愈伤诱导；④愈伤继代；⑤芽分化；⑥生根培养；⑦炼苗与移栽。对MS培养基进行改良，配方为：在基础的MS培养基中加入pvp40和酸水解酪蛋白，其他组分均无变化；pvp‑40的浓度为0.1‑1mg/L，酸水解酪蛋白浓度为0.15‑0.5mg/L。利用本发明所述的培养基配方和利用种子作为外植体，首次建立了结缕草Compadre组织培养体系；从种子诱导愈伤到获得体外植株，总周期为135天；以此为利用遗传转化技术来解决结缕草绿期短的问题奠定了基础，更好地推动了运动场草坪事业的发展。

主权项

1.一种运动场用结缕草组织培养快速繁殖的方法，其特征在于包括下列步骤：①外植体选取与消毒；②改良培养基的配备；③愈伤诱导；④愈伤继代；⑤芽分化；⑥生根培养；⑦炼苗与移栽；其中所述的结缕草为Compadre；对培养基的改良方法如下：对MS培养基进行改良：在基础的MS培养基中加入pvp40和酸水解酪蛋白，其它组分均无变化；pvp40的浓度为0.5mg/L，酸水解酪蛋白的浓度为0.25mg/L；愈伤诱导培养基的配方为：在改良MS培养基的基础上添加2,4‑D、6‑BA、维生素B1、α‑酮戊二酸、蔗糖和植物凝胶；其中2,4‑D的浓度为5mg/L，6‑BA的浓度为0.2mg/L，维生素B1的浓度为5mg/L，α‑酮戊二酸的浓度为120mg/L，蔗糖的量为30g/l，植物凝胶为3g/l，培养基的pH为5.8；愈伤继代培养基的配方为：在改良MS培养基的基础上添加2,4‑D、6‑BA、TDZ、维生素B1、α‑酮戊二酸、蔗糖和琼脂；其中2,4‑D的浓度为5mg/L，6‑BA的浓度为0.2mg/L，TDZ的浓度为0.05mg/L，维生素B1的浓度为5mg/L，α‑酮戊二酸的浓度为120mg/L，蔗糖的量为30g/l，琼脂的量为8g/l，培养基的pH为5.8；芽分化培养基的配方为：在改良MS培养基的基础上添加TDZ、NAA、GA、麦芽糖和琼脂，其中TDZ的浓度为1.2mg/L，NAA的浓度为0.05mg/L，GA的浓度为0.1mg/L，麦芽糖的浓度为30mg/L，琼脂的量为8g/l，培养基的pH为5.8；生根培养基的配方为：将改良MS培养基的营养元素减半，再添加蔗糖和琼脂，蔗糖的浓度为20mg/L，琼脂的浓度为10g/L，培养基的pH为5.8；所有阶段的培养环境为：光照为40‑80μE/m2/s，温度为26℃‑28℃。