[发明专利]一种用于生产生物柴油的微生物颗粒的制备方法

摘要

本发明公开了一种用于生产生物柴油的微生物颗粒的制备方法，属于生物柴油制备技术领域。本发明通过对池塘淤泥内的微生物与地沟油进行发酵，改变池塘淤泥内的微生物结构，随后通过提取其内的微生物，进行筛选培养，使用β射线照射诱导异变，待培养结束后淋洗培养基表面并收集淋洗液，收集筛选后的菌种，随后将钙沸石、盐酸溶液和十二烷基硫醇混合进行表面改性，以高温进行活化，使用葡萄糖溶液浸泡获得营养物，取出滤渣与淋洗液、海藻酸钠混合冷冻干燥，使菌种负载于滤渣，并进行包裹，最后粉碎过筛即可得用于生产生物柴油的微生物颗粒。本发明制备的生物柴油绿色环保，不会对环境造成污染，可明显提高反应转化率。

主权项

一种用于生产生物柴油的微生物颗粒的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）按质量比3:1，取含水量为40～45%池塘淤泥与地沟油放入发酵池内，在发酵池表面覆盖稻草，覆盖厚度为5～8cm，设定发酵池温度为32～40℃，发酵3～5天，在发酵过程中，每9～11h，向发酵池内再次加入地沟油，加入量为初次加入地沟油体积的20～40%；（2）在上述发酵结束后，对发酵池内的混合物进行过滤，收集滤渣，将滤渣自然晾晒至含水量为23～26%，随后将晾晒后的滤渣与1.8mol/L葡萄糖溶液按质量比1:3放入搅拌机中，以190r/min搅拌40～50min，再静置1～2h，收集上层清液，得混合菌液；（3）按重量份数计，取40～45份蔗糖、32～36份酵母浸膏、18～21份琼脂、4～6份尿素、2～3份七水硫酸镁、1～2份磷酸二氢钾、0.5～0.8份磷酸氢二钾及0.4～0.7份磺吡酮，搅拌均匀，放入高压灭菌锅中杀菌消毒，得培养基，按接种量13～16%，将上述混合菌液接种至培养基；（4）将上述接种后的培养基移至振荡培养箱中，设定温度为30～40℃，以130rpm培养18～22h，在培养过程中每3～5h，使用β射线照射培养基3～5s，培养结束后，使用无菌水以3mL/s淋洗培养基表面直至其无菌丝，收集淋洗液；（5）按质量比4:6:1，依次取钙沸石、质量分数为10%盐酸溶液和十二烷基硫醇混合均匀，静置30～40min，再进行过滤，将滤渣放入马弗炉中，设定温度为400～450℃，干燥1～2h，将干燥后的滤渣取出，浸泡于2.0mol/L葡萄糖溶液中静置30～40min后取出，按重量份数计，取40～50份上述淋洗液、28～31份浸泡后的滤渣及8～11份海藻酸钠，放入容器中，以120r/min搅拌2～3h，随后进行冷冻干燥，将干燥物放入粉碎机中粉碎，过200目筛，收集过筛颗粒，即可得用于生产生物柴油的微生物颗粒。