[发明专利]一种高效转染大菱鲆肌肉细胞的方法有效
| 申请号： | 201610839526.8 | 申请日： | 2016-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN106222202B | 公开（公告）日： | 2020-01-14 |
| 发明（设计）人： | 周慧慧;王旋;何艮;麦康森;高宗宇;江浩文 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/87 | 分类号： | C12N15/87 |
| 代理公司： | 11350 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 266100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高效转染大菱鲆肌肉细胞的方法。以构建的大菱鲆肌肉细胞系为材料，以连接有绿色荧光蛋白GFP基因的质粒为外源基因，采用核转染的方法进行转染，通过荧光倒置显微镜以及流式细胞仪检测转染效率。采用本发明建立的转染方法，大菱鲆肌肉细胞系转染绿色荧光蛋白基因的效率可达65％，同时细胞生长状态良好。本方法的建立为鱼类细胞信号转导、鱼类功能基因组学、鱼类营养学、水生环境毒理学等领域的研究提供了有力工具。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 转染 大菱鲆 肌肉 细胞 方法 | ||
【主权项】：
1.一种高效转染大菱鲆肌肉细胞的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：/n1)将大菱鲆肌肉细胞接种于细胞培养皿中，24℃条件下在L-15完全培养基中进行培养；/n2)待细胞融合度达到80％后，吸除原培养基，加入浓度为0.25％的胰酶-EDTA溶液消化细胞，并在显微镜下观察，待细胞皱缩、变圆后，加入含血清的L-15完全培养基终止消化，用移液器轻微吹打，获得细胞悬液；/n血清在L-15完全培养基的添加浓度为20％；/n3)取细胞悬液进行离心，用室温预热的SG电转缓冲液将细胞重悬；获得细胞悬液，细胞悬液中细胞浓度为10
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