[发明专利]稳定表达猪瘟病毒E2蛋白的重组细胞系、制备方法、应用、及猪瘟病毒亚单位疫苗有效
| 申请号： | 201610815262.2 | 申请日： | 2016-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN106755087B | 公开（公告）日： | 2019-02-26 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 北京博尔柯生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/40;C12N5/10;C12P21/02;A61K39/12;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京天昊联合知识产权代理有限公司 11112 | 代理人： | 柴亮;张天舒 |
| 地址： | 100190 北京市海淀*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及制备稳定表达猪瘟病毒E2蛋白的重组细胞系的方法，包括以下步骤：提供重组表达质粒，其包含彼此有效连接的猪瘟病毒E2蛋白编码序列和绿色荧光蛋白编码序列；将所述重组表达质粒与辅助质粒转染入真核细胞；通过荧光检测法筛选出表达所述重组表达质粒的单细胞，并对该单克隆细胞进行多次传代培养，获得经传代培养的细胞克隆；检测该细胞克隆中猪瘟病毒E2蛋白的表达量，筛选出经多次传代培养后仍能表达猪瘟病毒E2蛋白的重组细胞系，其中所述猪瘟病毒E2蛋白的核苷酸序列如序列1所示，所述编码猪瘟病毒E2蛋白的氨基酸序列如序列2所示。本发明还涉及稳定表达猪瘟病毒E2蛋白的重组细胞系、应用及猪瘟病毒亚单位疫苗。 | ||
| 搜索关键词： | 稳定 表达 猪瘟 病毒 e2 蛋白 重组 细胞系 制备 方法 应用 单位 疫苗 | ||
【主权项】：
1.一种制备稳定表达猪瘟病毒E2蛋白的重组细胞系的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提供重组表达质粒，该重组表达质粒包含彼此有效连接的猪瘟病毒E2蛋白编码序列和绿色荧光蛋白编码序列；2)通过脂质体转染法将所述重组表达质粒与辅助质粒转染入真核细胞；3)通过荧光检测法筛选出表达所述重组表达质粒的单细胞，并对该单克隆细胞利用悬浮培养法或静置培养法进行多次传代培养，获得经传代培养后的细胞克隆；4)检测所述细胞克隆中猪瘟病毒E2蛋白的表达量，筛选出经所述多次传代培养后仍然能够表达猪瘟病毒E2蛋白的重组细胞系，其中猪瘟病毒E2蛋白的重组细胞系能够表达至少100ug/ml,其中所述猪瘟病毒E2蛋白的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示，所述编码猪瘟病毒E2蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.2所示。
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