[发明专利]一种移植后血管外膜成纤维细胞的原代培养方法

摘要

本发明公开了一种移植后血管外膜成纤维细胞的原代培养方法，步骤如下：取胸腹主动脉移植两周后的大鼠的移植血管；将血管放于含30％FBS的DMEM/F12培养液的培养皿中，剖开血管腔，将血管平铺，剥离血管外膜；移入另一培养皿中，将血管剪碎；将培养液及血管组织块吸入经FBS浸润后的培养瓶中；倾斜培养瓶，弃掉培养液，再将血管组织块密度均匀的摊平于培养瓶底部；翻转培养瓶，培养3‑4h后，翻转培养瓶，之后5‑7天内静置培养瓶；待细胞生长达80％融合状态时消化传代，传代至3代即可实验用或冻存备用。本发明的原代培养方法不仅为实验研究节约了大量的时间和资金，还为体外模拟移植性血管的体内环境，研究移植性血管疾病及其分子机制提供了更真实、更方便的实验模型。

主权项

一种移植后血管外膜成纤维细胞的原代培养方法，其特征在于，步骤如下：(1)取胸腹主动脉移植两周后的大鼠的移植血管，用PBS缓冲液冲洗血管；(2)将血管放于含30％(体积百分数)FBS的DMEM/F12培养液的培养皿中，纵向剖开血管腔，剥离血管外膜；(3)将血管外膜移入另一含30％(体积百分数)FBS的DMEM/F12培养液的培养皿中，用小弯剪将血管剪碎；(4)用FBS浸润培养瓶底面；(5)将培养皿中的培养液及剪碎后的血管组织块吸入经FBS浸润后的培养瓶中，将组织块均匀铺在培养瓶的底部；(6)倾斜培养瓶，将其中的培养液吸出弃掉，再将血管组织块密度均匀的摊平于培养瓶底部，组织块间隔为4‑6mm；(7)翻转培养瓶，在另一面加入含30％(体积百分数)FBS的DMEM/F12培养液，盖上瓶盖，放入37℃培养箱中培养，3‑4h后，翻转培养瓶后静置培养瓶，以助其贴壁生长，继续培养至5‑7天，细胞长满培养瓶；(8)待细胞生长达80％融合状态时用胰酶消化传代，传代至3代即可实验用或冻存备用。