[发明专利]免疫细胞高活率冻存方法在审
| 申请号： | 201610766783.3 | 申请日： | 2016-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN107771781A | 公开（公告）日： | 2018-03-09 |
| 发明（设计）人： | 周瑶;马洁;赵刚;冯郸;许蕊;翟雷垒 | 申请（专利权）人： | 天津市康婷生物工程有限公司 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司12209 | 代理人： | 赵瑶瑶 |
| 地址： | 300200 天津市西青区西青经*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种免疫细胞高活率冻存方法，步骤如下⑴将外周血离心800g，10min，离心采用8升4降的方式，取上清56℃灭活30min，离心2000g，10min，取上清作为自体血清；⑵用生理盐水倍比稀释血液，将重悬后液体缓慢加注于装有ficoll分离液的离心管中，Ficoll与液体比例＝34，离心600g，40min，⑶吸取白膜层，用生理盐水冲洗，离心400g，10min，重复两次，生理盐水重悬计数，采用新的冻存保护剂进行冻存即可本发明采用改进后的技术方案可以更好的保护冻存细胞，尽量减少在冻存过程中所受损伤，增加复苏后细胞的存活率达90％以上。 | ||
| 搜索关键词： | 免疫 细胞 高活率冻存 方法 | ||
【主权项】：
一种免疫细胞高活率冻存方法，其特征在于：步骤如下：⑴将外周血离心800g，10min，离心采用8升4降的方式，取上清56℃灭活30min，离心2000g，10min，离心采用8升8降的方式，取上清作为自体血清；⑵用生理盐水倍比稀释血液，将重悬后液体缓慢加注于装有ficoll分离液的离心管中，Ficoll与液体比例＝3：4，离心600g，40min，离心的方式1升0降的方式；⑶吸取白膜层，用生理盐水冲洗，离心400g，10min，离心采用8升8降的方式，重复两次，生理盐水重悬计数；⑷外周血单个核细胞分为三部分，其中两部分细胞冻存，另外两部分细胞用于直接培养，分别按照NK体外扩增培养方案及DC‑CIK体外扩增培养方案培养；⑸冻存保护剂以下列体积百分比为原料进行复配：⑹采用上述冻存保护剂对PBMC细胞进行冻存。
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