[发明专利]重组α-L-鼠李糖苷酶粗提液用于微通道反应器中催化定向水解黄酮苷的方法

摘要

重组α‑L‑鼠李糖苷酶粗提液用于微通道反应器中催化定向水解黄酮苷的方法。步骤为将表达的Rha型α‑L‑鼠李糖苷酶超声提取粗酶液直接用于微通道反应器内专一性催化水解黄酮苷，如催化芦丁水解生成具有生理活性的异槲皮苷，转化产物纯度高，易分离，无副产物。通过加入表面活性剂建立共溶剂体系，解决了粗酶液在微通道内易堵塞等技术难题，稳定了催化介质体系，提高了酶的重复利用性，强化了微反应器的时空产率。

主权项

1.重组α‑L‑鼠李糖苷酶粗提液用于微通道反应器中催化定向水解黄酮苷的方法，其特征在于步骤为：分别构建RhaA型和RhaB型的表达α‑L‑鼠李糖苷酶的重组工程菌；所述的工程菌的质粒载体为pET21a；所述工程菌的宿主菌为大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3)；所述的重组工程菌的培养方法为：接种到50 μg/mL氨苄青霉素钠盐的LB液体培养基中生长到指数期，然后经异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达；所述的IPTG浓度为200~800 μM；所述的生长温度为22~37 ℃；所述的诱导温度为17~25 ℃；所述的诱导时间为12~20 h；将上述诱导表达结束的菌液1L在4℃下 8000 rpm 离心5 min，收集菌体；用pH7.2~7.4 PBS缓冲液清洗菌体两次；然后分别用不同超声缓冲液重悬菌体进行超声；超声缓冲液为：PBS，pH7.0，30 mL，超声波功率为0.6 kW，超声时间为12 min；超声结束后12000 rpm离心30 min，收集上清即为α‑L‑鼠李糖苷酶的粗酶液，测得酶活为24.23 U/mg；以磷酸氢二钠‑柠檬酸缓冲液，配制pH=5的0.02 g/L的芦丁母液；量取上述制备的粗酶液和0.02 g/L芦丁液以等体积分别从两个通道泵入微反应器内，同时在粗酶液中添加2%的离子液体[Toma]Tf₂N，在35 ℃条件下充分接触，流速为2 μL/min。