[发明专利]一种测定血浆中5;6-二氢-7;8-二甲基-4;5-二氧-4-氢-吡喃喹啉-2-羧酸浓度的方法

摘要

本发明公开了一种测定血浆中5，6‑二氢‑7，8‑二甲基‑4，5‑二氧‑4‑氢‑吡喃喹啉‑2‑羧酸浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测血浆样品，加入一定量的无机酸酸化，酸化后的血浆样品加入有机溶媒沉淀蛋白，高速离心，取上清液加入一定量的去离子水，混匀后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测，本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，适合于测定血浆中5，6‑二氢‑7，8‑二甲基‑4，5‑二氧‑4‑氢‑吡喃喹啉‑2‑羧酸的浓度。

主权项

1.一种测定血浆中5，6‑二氢‑7，8‑二甲基‑4，5‑二氧‑4‑氢‑吡喃喹啉‑2‑羧酸浓度的方法，其特征在于，血浆样品经预处理后经液质联用系统检测其浓度，具体方法包括如下步骤：(1)血浆样品预处理：取血浆样品，加入盐酸溶液酸化，加入内标左乙拉西坦溶液，加入甲醇沉淀蛋白，高速离心，吸取上清液，加入去离子水，混匀后进样；(2)将步骤(1)预处理后的血浆样品进行液相色谱分离；色谱柱为Agilent ZORBAX EclipseC18，4.6×100mm，3.5μm；流动相：甲醇和水相，水相为6mmoL·L^‑1醋酸铵水溶液，水相中按照体积比含有0.02％氨水；梯度洗脱：0‑8.5min，水相与甲醇的体积比为75∶25；8.6‑9.6min，水相与甲醇的体积比为5∶95；9.7‑13.0min，水相与甲醇的体积比为75∶25；柱温为35℃；流速为800μL·min‑1；进样量：50μL；(3)质谱测定：条件包括：离子源：电喷雾离子化电离源ESI；离子检测方式：多反应监测；离子极性：正离子；离子源电压IS：4500V；离子源温度TEM：750℃；碰撞气CAD：8L·min‑1；气帘气CUR：35L·min‑1；离子源Gas1：65L·min‑1；离子源Gas2：70L·min‑1；检测对象的离子选择通道：MY‑1250，[M+H]+，m/z 286.1/198.2，DP106，EP10，CE47，CXP15；内标左乙拉西坦，[M+H]+，m/z 171.3/126.2，DP27，EP6，CE40，CXP10；(4)计算：采用内标法，以5，6‑二氢‑7，8‑二甲基‑4，5‑二氧‑4‑氢‑吡喃喹啉‑2‑羧酸和内标左乙拉西坦的峰面积比值代入标准曲线方程计算5，6‑二氢‑7，8‑二甲基‑4，5‑二氧‑4‑氢‑吡喃喹啉‑2‑羧酸浓度。