[发明专利]葡萄酒中酰胺类杀菌剂的固相萃取‑气相色谱‑串联质谱检测方法

摘要

本发明公开了一种葡萄酒中酰胺类杀菌剂的固相萃取‑气相色谱‑串联质谱检测方法，本发明能够同时测定葡萄酒中样品中吲唑磺菌胺、氟啶酰菌胺、硅噻菌胺、啶酰菌胺等4种酰胺类杀菌剂。在葡萄酒样品中加入超纯水稀释得到待检液，待检液经HLB固相萃取柱净化，使用C18反相柱分离；目标分析物在多反应监测模式下以保留时间和离子对信息比较进行定性分析，同位素内标法定量，本方法分析速度快、灵敏度高、重现性和准确度好，为评价葡萄酒样品质量提供了新的检测方法。

主权项

一种葡萄酒中酰胺类杀菌剂的固相萃取‑气相色谱‑串联质谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（一）待测样品的制备：称取4.7‑5.3g葡萄酒样品，葡萄酒中加入超纯水，混匀后得到待检液；（二）待测样品的净化：将固定相萃取柱进行预处理，将步骤（一）制备的待检液上萃取柱，经水和甲醇/水溶液淋洗除去杂质，再用洗脱溶剂洗脱固定相萃取柱上的吲唑磺菌胺、氟啶酰菌胺、硅噻菌胺、啶酰菌胺得到洗脱液，将洗脱液浓缩富集后，用甲醇溶剂稀释并经0.22μm微孔滤膜过滤后得到待测样品溶液；所述固定相萃取柱为Waters Oasis HLB SPE柱，并通过甲醇、水对Waters Oasis HLB SPE柱进行活化处理；淋洗溶剂为水和体积比为1/3的甲醇水混合溶液，洗脱溶剂为甲醇；（三）标准溶液的配制：配制吲唑磺菌胺、氟啶酰菌胺、硅噻菌胺、啶酰菌胺溶液阶梯浓度的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液的浓度为1.0 ng/mL、2.0ng/mL、5.0 ng/mL 、10.0 ng/mL 和20.0 ng/mL，内标物啶酰菌胺‑D4浓度为1.0 ng/mL，所述气相色谱和串联质谱的参数条件如下：色谱柱：HP‑5MS；30 m×0.25 mm×0.25 μm流速：1.2 ml/min 高纯氦仪器：Agilent 7890B‑7000C碰撞气：高纯氮：1.5ml/min，猝灭流量：2.25ml/min 高纯氦升温程序：80℃升温到200℃，升温速度为每分钟25℃；200℃升到310℃，升温速度为每分钟10℃，并在310℃保持3分钟；进样口温度：350℃；接口280℃进样量：1µL；不分流进样；离子化：EI源；（四）待测样品的检测：将步骤（二）中的待测样品溶液和混合标准工作溶液在气相色谱‑串联质谱仪上分别进样，获得以混合标准工作溶液中吲唑磺菌胺、氟啶酰菌胺、硅噻菌胺、啶酰菌胺的浓度和啶酰菌胺‑D4浓度的比值为横坐标，再以混合标准工作溶液中吲唑磺菌胺、氟啶酰菌胺、硅噻菌胺、啶酰菌胺的峰面积和啶酰菌胺‑D4峰面积的比值为纵坐标的工作曲线，还有获得可以确定母离子的吲唑磺菌胺、氟啶酰菌胺、硅噻菌胺、啶酰菌胺、啶酰菌胺‑D4的一级质谱图，确定母离子后，采用子离子扫描获得二级质谱图，然后从二级质谱图中选取定量离子和定性离子，然后用工作曲线对定量离子进行定量计算，内标法定量获得待测样品溶液中吲唑磺菌胺、氟啶酰菌胺、硅噻菌胺、啶酰菌胺的浓度。