[发明专利]一种虾青素亚油酸单酯的制备方法

摘要

本发明公开了一种虾青素亚油酸单酯的制备方法，包括以下步骤：步骤一、粗提液的制备：用天平称取5.0 g雨生红球藻藻粉，加入纤维素酶液，破壁，离心，弃上清后，丙酮浸提，再次离心后，弃去下层沉淀，制得粗提液；步骤二、溶剂系统的建立：配制正己烷‑乙腈‑甲醇一级溶剂系统和配制正己烷‑甲醇二级溶剂系统；步骤三、高速逆流色谱纯化：在474nm波长下采集数据，首先以所述一级溶剂系统为实验条件，收集洗脱时间为12‑20min的组分，再以二级溶剂系统为实验条件，收集洗脱时间为52‑60min的组分，制得化合物，即虾青素亚油酸单酯。本发明首次采用高速逆流色谱纯化法从雨生红球藻藻粉分离得到了虾青素亚油酸单酯，从而对后续虾青素酯的研究具有重大意义。

主权项

1.一种虾青素亚油酸单酯的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、粗提液的制备：用天平称取5.0g雨生红球藻藻粉，加入浓度为0.5‑0.7mg/mL的纤维素酶液200mL，酶反应pH为4.0‑5.0，在45‑50℃的条件下破壁25‑30min，然后在5000rpm条件下离心5min，弃上清后，将500mL的丙酮加入藻粉中，浸提40min，再次离心后，弃去下层沉淀，制得粗提液；将所述粗提液浓缩蒸干，充氮，于‑20℃条件下保存，备用；步骤二、溶剂系统的建立：按体积比4∶1∶2配制正己烷‑乙腈‑甲醇一级溶剂系统和按体积比2∶1配制正己烷‑甲醇二级溶剂系统；每个溶剂系统分别按照上述比例配制溶液1500mL，置于分液漏斗中，剧烈振荡充分混合后静置分层，平衡后将上下两相分开，两个溶剂系统均以下相作为流动相，上相作为固定相，在使用前上下相分别超声脱气30min；步骤三、高速逆流色谱纯化：打开泵，将超声脱气后的上相作为固定相以30mL/min的流速泵入到高速逆流色谱仪中，直至上相充满整个HSCCC分离管中，暂停泵，将进液端放到流动相的试剂瓶中，打开主机的电源，设定转速850r/min，启动泵；在出液端用干净的量筒接液，在474nm波长下采集数据，首先以所述一级溶剂系统为实验条件，收集洗脱时间为12‑20min的组分，再以二级溶剂系统为实验条件，将该组分溶解在二级溶剂系统的下相中，收集洗脱时间为52‑60min的组分，初步用TLC分析流出物，合并相同组分，制得化合物，即虾青素亚油酸单酯；步骤四、纯化物的鉴定：采用高效液相色谱HPLC法或采用ESI‑MS法分析所述化合物，或采用高效液相色谱HPLC法分析皂化后的所述化合物。