[发明专利]cLYZ和hLTF双抑菌基因重组腺病毒的构建方法及重组腺病毒和应用

摘要

本发明公开了一种cLYZ和hLTF双抑菌基因重组腺病毒的构建方法及重组腺病毒和应用，从石斑鱼头肾组织和人乳体细胞总RNA中分别扩增出cLYZ基因和hLTF基因，将获得的目的基因克隆到pDC315穿梭载体中，将含有目的基因的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒经脂质体共转染HEK293细胞，包装获得高滴度的重组腺病毒；评价cLYZ基因和hLTF基因在腺病毒介导下对奶牛乳房炎主要致病菌的联合抑制作用。

主权项

一种cLYZ和hLTF双抑菌基因重组腺病毒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)从石斑鱼头肾组织总RNA和人乳体细胞总RNA中分别扩增出cLYZ基因序列GI:JQ‑287658.1和hLTF基因序列GI:AY‑875691.1；所述的cLYZ基因和hLTF基因的扩增包括：以cLYZ‑F SEQ ID NO：1和cLYZ‑R SEQ ID NO：2为引物，以石斑鱼头肾组织总RNA为模版，扩增cLYZ基因序列；以hLTF‑F SEQ ID NO：3和hLTF‑R SEQ ID NO：4为引物，以人乳体细胞总RNA为模版，扩增hLTF基因序列；2)将获得的目的基因分别克隆到pDC315‑MCS‑EGFP穿梭载体中，与骨架载体pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞，包装获得重组腺病毒Ad‑cLYZ‑hLTF。