[发明专利]一种金‑上转换纳米粒子三聚体的制备方法及其应用

摘要

一种金‑上转换纳米粒子三聚体的制备方法及其应用，属于分析化学技术领域。本发明主要包括20nm粒径的金纳米粒子的合成、金纳米粒子上Mucin‑1适配体的修饰、上转换纳米粒子上AFP适配体的修饰、金纳米粒子上AFP和Mucin‑1适配体部分互补序列的修饰、金‑上转换纳米粒子三聚体的组装、荧光和拉曼检测；在外加AFP后，荧光会增强；而在外加Mucin‑1后，拉曼信号会减弱，从而建立荧光信号与AFP浓度、拉曼信号与Mucin‑1浓度的标准曲线。本发明提供了一种用金‑上转换纳米粒子三聚体对癌症标志物的多重超灵敏检测方法，与传统检测方法相比成本低，灵敏度高，方便快捷，具有很好的实际应用前景。

主权项

一种金‑上转换纳米粒子三聚体的制备方法，其特征在于包括金纳米粒子的合成，上转换纳米粒子的提供，金‑上转换纳米粒子三聚体的组装及结构表征，具体步骤如下：（1）金纳米粒子的合成：进行20nm 粒径金纳米粒子的合成；48.75mL超纯水在搅拌下加入1.25mL 4g/L的氯金酸，使其沸腾，沸腾状态保持2‑3min，加入1.2mL 10mg/mL的柠檬酸钠水溶液，观察颜色变化，待颜色不变后冷却至室温，放入冰箱中待用；（2）上转换纳米粒子的提供：由北京万德高科技发展有限公司购买；（3）金‑上转换纳米粒子三聚体的组装：取两管50mL步骤（1）制备的已浓缩好的 10nM 20nm粒径金纳米粒子，分别与巯基修饰的Mucin‑1的适配体及互补序列进行偶联，金纳米粒子︰巯基修饰的Mucin‑1的适配体的摩尔比为1︰3，金纳米粒子︰互补序列的摩尔比也为1︰3；再将50mL上转换纳米粒子与巯基修饰的AFP的适配体偶联，其中上转换纳米粒子︰巯基修饰的AFP摩尔比为1︰5；三管试剂均在室温下过夜反应，13000r/min 离心15min，弃上清，然后用50mL的TBE缓冲液分散沉淀，分别得到Au‑Mucin‑1适配体、Au‑互补序列及UCNP‑ AFP适配体，待用；将50mL Au‑Mucin‑1适配体、50mL Au‑互补序列和50mL UCNP‑ AFP适配体杂交反应12h，得到组装产物金‑上转换纳米粒子三聚体Au‑Au‑UCNP；离心15min，弃上清，后用100mL的超纯水分散，进行TEM、荧光和拉曼表征。