[发明专利]匹马霉素B菌株的基因工程改造方法有效
| 申请号： | 201610579909.6 | 申请日： | 2016-07-21 |
| 公开（公告）号： | CN106190941B | 公开（公告）日： | 2019-09-27 |
| 发明（设计）人： | 白林泉;齐震 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/76;C12N15/53;C12N15/31;C12P19/62;C12R1/465 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 杨元焱 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种匹马霉素B菌株的基因工程改造方法，是通过在菌株Streptomyces chattanoogensis QZ01中以PKS基因中的DH11KR11结构域替换DH12KR12结构域并缺失后修饰基因pimD，实现匹马霉素B产量的大幅度提高，并完全消除了匹马霉素A与匹马霉素C的产生。本发明利用代谢工程方法构建了一株低毒匹马霉素B的高产菌株，该菌株在完全消除匹马霉素A与匹马霉素C的基础上，将低毒匹马霉素B的产量提高了约11倍，实验室摇瓶发酵水平达到805mg/L，为匹马霉素B的工业化生产奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 霉素 菌株 基因工程 改造 方法 | ||
【主权项】：
1.一种匹马霉素B菌株的基因工程改造方法，其特征在于，通过在菌株Streptomyces chattanoogensis QZ01中以PKS基因中的DH11KR11结构域替换DH12KR12结构域并缺失后修饰基因pimD，实现匹马霉素B产量的大幅度提高，并完全消除了匹马霉素A与匹马霉素C的产生；所述DH11KR11结构域来源于PKS基因pimS3，DH11KR11结构域的序列如SEQ ID NO.1所示；所述DH12KR12结构域来源于PKS基因pimS4，PKS基因pimS4的序列如SEQ IDNO.2所示，其中DH12KR12结构域的范围为2713bp至4614bp；所述pimD为P450单加氧酶基因，负责编码催化匹马霉素B到匹马霉素A的转化，pimD基因的序列如SEQ ID NO.3所示；所述以PKS基因中的DH11KR11结构域替换DH12KR12结构域并缺失后修饰基因pimD的构建步骤如下：一、设计并构建用于DH12KR12结构域替换的质粒；二、在菌株Streptomyces chattanoogensis QZ01的基础上同框敲除PKS基因pimS4得到受体菌株；三、将步骤一构建得到的质粒接合转移导入步骤二获得的受体菌株中，筛选得到DH12KR12结构域替换菌株；四、在步骤三获得的菌株的基础上同框敲除后修饰基因pimD，得到DH12KR12结构域替换及基因pimD缺失菌株。
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