[发明专利]一种基于代谢组学技术的有机污染物细胞毒性作用机制的研究方法

摘要

本发明公开了一种基于代谢组学技术的持久性有机污染物细胞毒性作用机制的研究方法，首先通过有机污染物对HepG2细胞的暴露，利用UHPLC/Q‑Trap MS能有效地对胞内及胞外培养液代谢产物进行分析，结合统计学处理及代谢路径分析能直观地反映有机污染物对细胞代谢路径地影响，并利用生物学检测方法能进一步对相关代谢通路限速酶活性进行快速分析。根据细胞内代谢物含量的变化及其所在代谢路径中限速酶活性的变化阐明了有机污染物的细胞毒性作用机制，基于分子生物学构建了一种污染物毒性作用机制评估方法。本发明具有易于操作，检测快速，灵敏度高，选择性强，重复性好，获得信息量全面等优点。

主权项

一种持久性有机污染物细胞毒性作用机制的评估方法，其特征在于：包括以下步骤：(a)有机污染物对细胞进行暴露培养24小时后，收取细胞及胞外培养液样品，作为暴露组；以没有采用有机污染物对细胞进行暴露的、且与暴露组同样条件培养24小时后，收取的细胞及胞外培养液样品，作为控制组；(b)采用液液萃取法分别对暴露组和控制组的胞内及胞外代谢物进行提取，得到代谢产物提取液；(c)利用基于UHPLC/Q‑Trap MS的质谱方法对步骤a所得代谢产物提取液中代谢产物进行定量分析；(d)统计学分析处理UHPLC/Q‑Trap MS检测的胞内代谢产物，将暴露组和控制组所得的代谢产物定量分析结果进行比对，找出暴露组相对于控制组含量显著变化的代谢产物，并进一步做出这些代谢产物的相关网络图；(e)代谢路径分析对胞内代谢产物进行深入分析，pathway分析找到受有机污染物显著影响的代谢通路，并对受显著影响的代谢路径中限速酶活性进行测定，可以判断出有机污染物对细胞的毒性作用方式。