[发明专利]一种快速检测CHO细胞发酵液中重组人神经生长因子含量的方法有效
| 申请号： | 201610569958.1 | 申请日： | 2016-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN106226428B | 公开（公告）日： | 2019-01-01 |
| 发明（设计）人： | 张文宇;白羊;章永垒;陈星;黄奋飞;阮卡;葛平辉;邹有土;马燕玲;陈胜亮;王明灶 | 申请（专利权）人： | 未名生物医药有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02 |
| 代理公司： | 厦门市精诚新创知识产权代理有限公司 35218 | 代理人： | 方惠春 |
| 地址： | 361000 福建省厦*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种快速检测CHO细胞发酵液中重组人神经生长因子含量的方法。具体采用丁基硅烷键合硅胶反相C4柱的色谱柱；流动相：A为0.1体积%三氟乙酸水溶液，B为0.1体积%三氟乙酸乙腈溶液，0.22μm滤膜过滤，超声脱气10min后使用，变梯度洗脱，极性有机溶剂的浓度为连续性递增：0‑30min由10体积%B升到40体积%B，30‑35min由40体积%B升到90体积%B，35‑36min由90体积%B降到10体积%B，36‑41min维持10体积%B 5min；最后进行含量计算即可。该检测方法准确度高、精密度好，系统适用性、回收率、线性关系、稳定性好。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 快速 检测 cho 细胞 发酵 重组 神经 生长因子 含量 方法 | ||
【主权项】：
1.一种快速检测CHO细胞发酵液中重组人神经生长因子含量的方法，其特征在于，步骤为：1）样品处理：取重组人神经生长因子CHO细胞发酵液，4000rpm离心5min，取上清液，过0.22μm滤膜后进行HPLC检测；2）HPLC检测：色谱柱为丁基硅烷键合硅胶反相C4柱；检测器为紫外检测器；检测波长为280nm；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；进样体积为20μL；流动相：A为0.1体积%三氟乙酸水溶液，B为0.1体积%三氟乙酸乙腈溶液，0.22μm滤膜过滤，超声脱气10min后使用，变梯度洗脱，极性有机溶剂的浓度为连续性递增：0‑30min由10体积%B升到40体积%B，30‑35min由40体积%B升到90体积%B，35‑36min由90体积%B降到10体积%B，36‑41min维持10体积%B 5min；3）含量计算：以重组神经生长因子CHO细胞发酵液中重组人神经生长因子主峰峰面积通过重组人神经生长因子标准品标准曲线的线性回归方程进行计算。
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