[发明专利]一种成纤维细胞的快速提取方法及应用在审
| 申请号： | 201610537670.6 | 申请日： | 2016-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN106047813A | 公开（公告）日： | 2016-10-26 |
| 发明（设计）人： | 赵永祥;卢小玲;周素芳;黄盈盈 | 申请（专利权）人： | 广西医科大学 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 重庆为信知识产权代理事务所(普通合伙) 50216 | 代理人： | 王婷婷 |
| 地址： | 530021 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种成纤维细胞的快速提取方法。包括以下步骤：S1）取离体的肿瘤组织，剪碎，加入胶原酶溶液进行消化；S2）转移到离心管中进行震荡、孵育及离心后，取沉淀物放进细胞培养箱中培养；S3）再加入胶原酶溶液进行消化，并重复步骤S2），得到经交替消化、培养后的组织结构松散的肿瘤组织；S4）加入胰酶溶液，常温静置后加入胎牛血清终止消化，再将悬浮物倒掉，得到胰酶消化后贴壁的肿瘤单细胞；S5）加入DMEM完全培养基进行传代培养，得到所述肿瘤相关成纤维细胞。还提供了本发明提取方法的应用，利用本提取方法得到的成纤维细胞纯度非常高，成纤维细胞高表达FAP，表达率为99.2%，适合医学推广。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 纤维 细胞 快速 提取 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种成纤维细胞的快速提取方法，其特征在于，包括以下步骤：S1）取离体的肿瘤组织，剪碎，然后往剪碎后的肿瘤组织中加入胶原酶溶液进行消化，得到胶原酶消化后的肿瘤组织；S2）将所述胶原酶消化后的肿瘤组织转移到离心管中进行震荡、孵育及离心后，取沉淀物放进细胞培养箱中培养，得到组织结构松散的肿瘤组织；S3）再加入胶原酶溶液进行消化，并重复步骤S2），得到经交替消化、培养后的组织结构松散的肿瘤组织；S4）向步骤S3）所述组织结构松散的肿瘤组织中加入胰酶溶液，常温静置后加入胎牛血清终止消化，再将悬浮物倒掉，得到胰酶消化后贴壁的肿瘤单细胞； S5）在所述胰酶消化后贴壁的肿瘤单细胞中加入DMEM完全培养基进行传代培养，得到所述肿瘤相关成纤维细胞。
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