[发明专利]一种同时检测白酒原辅料中七种真菌毒素的方法

摘要

本发明公开了一种同时检测白酒原辅料中七种真菌毒素的方法，采用改良的QuEChERS方法进行提取，无需进一步净化，利用高效液相色谱实现真菌毒素的分离，联用四级杆‑静电场轨道阱质谱（Q‑Orbitrab），将高效的母离子选择性和高分辨的精确分子质量（质量数可精确到小数点后5位）相结合，能够准确定性定量白酒及原辅料中的真菌毒素，基质外标法定量。真菌毒素可在9min内实现全部有效分离,真菌毒素在各自的线性响应范围内线性关系良好，相关系数R²>0.999，最低定量限低于1.0μg/L，最低检测限低于0.1μg/L，回收率介于为70%‑120%之间，相对标准偏差（RSD）为0.5%‑4%。而本发明与国标法相对比具有快速、简便、经济、高效、安全等特点，可适用于白酒及原辅料样品中各真菌毒素的分离和定量检测。

主权项

一种同时检测白酒原辅料中七种真菌毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）待测样品的制备：称取均质后的待测样品，80%乙腈水溶液萃取后过0.22μm微孔滤膜，待测；2）真菌毒素混标制备：配制呕吐毒素、赭曲霉素、玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2七种毒素混标，先分别用纯甲醇溶解并定容至刻度，其中玉米赤霉烯酮浓度为50mg/L，其余浓度均为10mg/L，配制的标准储备溶液于‑20℃下避光保存备用；按步骤1）方法制成空白样品提取液，用空白样品提取液将标准储备溶液配成浓度1‑500 ppb溶液范围内至少6个点的基质混合标准溶液，待测；3）步骤1）样品和步骤2）标品分别采用高分辨Q‑Exactive液质联用仪进行真菌毒素分离、检测，色谱条件为：色谱柱：HypersilGOLDC18色谱柱（100mm×2.1mm，3μm）；流动相：A：5mm甲酸铵水溶液，B：甲醇；流速：0.30mL/min；柱温：40℃；进样量：5μL；梯度洗脱程序：时间（min）00.5579A%9090101090B%1010909010质谱条件为：离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：正离子扫描；检测方式：Full‑MS/t‑MS2模式；鞘气压力：35arb；辅助气压力：10arb；毛细管电压：3.80kv（+），3.20kv（‑）；毛细管温度：350℃；探针温度：300℃；分辨率：70，000；扫描范围：56‑840m/z，Full‑MS扫描模式；HCD碰撞能量：50eV；4）通过ToxID软件中真菌毒素数据库的精确质量数和保留时间筛选混标中和样品中真菌毒素，然后对比样品与标品Full‑MS模式检测的一级碎片离子定性以及t‑MS2模式检测的二级碎片离子定性，得到色谱图后采用自动积分，通过拟合标准曲线计算得到测定液中待测组分的浓度为C，单位为µg/L，样品中真菌毒素定量按照公式进行计算:X=,其中X为样中待测组分的含量，单位mg/kg；C为测定液中待测组分的浓度，单位为µg/L；V为加入乙腈的体积，单位为ml；M为样品称样量，单位为g。