[发明专利]醛脱氢酶、其重组表达转化体及在他汀前体合成中的应用

摘要

醛脱氢酶、其重组表达转化体及在他汀前体合成中的应用。本发明涉及一种催化活性高、立体选择性好、底物耐受性好的醛脱氢酶LeADH及其突变体，含有该酶及突变体基因的重组表达载体和重组表达转化体，重组LeADH的制备，以及LeADH在制备他汀药物中间体(3R,5S)‑6‑氯‑2,4,6‑三脱氧‑D‑赤型吡喃己糖内酯(CTeHL)中的应用。所述氧化酶为来源于长孢洛德酵母的醛脱氢酶，以NADP⁺为辅酶，反应生成的还原型辅酶NADPH在NADPH氧化酶NOX的催化下，以氧气作为氧化剂，实现NADP⁺的氧化再生。与现有技术相比，本发明所述酶法催化制备CTeHL的方法无须使用环境污染严重的化学氧化剂，绿色环保，并且具有反应条件温和、底物浓度高等优点，因此在降血脂药物他汀中间体的工业生产中具有很好的应用前景。

主权项

1.一种醛脱氢酶，其特征在于，其为NADP⁺依赖型的醛脱氢酶，是蛋白质(a)或蛋白质(b)：蛋白质(a)：如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的蛋白质；蛋白质(b)：选自如下序列对应的蛋白质：(1)SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第87位的异亮氨酸残基替换为苯丙氨酸残基；或，(2)SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第127位的缬氨酸残基替换为半胱氨酸残基；或，(3)SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第217位的谷氨酸残基替换为缬氨酸残基；或，(4)SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第235位的天冬酰胺残基替换为组氨酸残基；或，(5)SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第236位的脯氨酸残基替换为组氨酸残基；或，(6)SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第236位的脯氨酸残基替换为酪氨酸残基；或，(7)SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第235位的天冬酰胺残基替换为组氨酸残基，第236位的脯氨酸残基替换为酪氨酸残基；或，(8)SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第235位的天冬酰胺残基替换为组氨酸残基，第236位的脯氨酸残基替换为组氨酸残基；或，(9)SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第150位的脯氨酸残基替换为谷氨酰胺残基，第235位的天冬酰胺残基替换为组氨酸残基，第236位的脯氨酸残基替换为组氨酸残基；或，(10)SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第87位的异亮氨酸残基替换为丙氨酸残基，第235位的天冬酰胺残基替换为组氨酸残基，第236位的脯氨酸残基替换为组氨酸残基；或，(11)SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第87位的异亮氨酸残基替换为丙氨酸残基，第150位的脯氨酸残基替换为谷氨酰胺残基，第235位的天冬酰胺残基替换为组氨酸残基，第236位的脯氨酸残基替换为组氨酸残基；或，(12)SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第87位的异亮氨酸残基替换为丙氨酸残基，第127位的缬氨酸残基替换为半胱氨酸残基，第235位的天冬酰胺残基替换为组氨酸残基，第236位的脯氨酸残基替换为组氨酸残基。