[发明专利]蛙三倍体纯系高效育成方法

摘要

本发明公开了一种蛙三倍体纯系高效育成方法，包括如下步骤：他莫昔芬喂养料的配备、对母蛙进行投喂他莫昔芬喂养料、热休克处理、雌激素抑制剂溶液的配制、取受精卵放入雌激素抑制剂溶液中，常温浸泡、取蝌蚪，投喂氯米芬幼体料、取雄性四倍体作为父本，取普通二倍体作为母本，采用回交的方式，获得100%三倍体。通过此方法，可获得100%的三倍体纯系，提高了三倍体的育成率与出苗率，减少了育种与选种的麻烦，更主要是对自然水产品种种质和生态环境无污染。

主权项

蛙三倍体纯系高效育成方法，包括如下步骤：（1）他莫昔芬喂养料的配备：取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂，加入到蛙人工饲养饲料中，制成喂养料，其中他莫昔芬含量为25～30g/kg喂养料，待用；（2）投喂：在母蛙产卵前5～10天，按常规饲料投喂方法对母蛙进行投喂他莫昔芬喂养料，每天两次，早上8：00每100g母蛙投喂10～20g，下午6：00每100g母蛙投喂10～15g；至其卵发育成熟，然后，取雄蛙放在一起，使其自然产卵交配受精，得受精卵，备用；（3）热休克处理：在第一次卵裂前3～5min，把步骤（2）的受精卵放入水温为39～42℃、溶氧达5‑8mg/l以上的水体中，保持3～5min；然后取出，放入常规孵化水槽中待用；（4）雌激素抑制剂溶液的配制：将氯米芬和睾酮一起溶于80%～90%的乙醇中，再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液，其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为80～140mg/l，睾酮的浓度为20～80mg/l；（5）取步骤（3）处理后的受精卵放入按步骤（4）所制备的雌激素抑制剂溶液中，常温浸泡10～30s，然后取出放于孵化池中正常孵化，至出苗成蝌蚪；（6）取步骤（5）中的蝌蚪，投喂氯米芬幼体料；配比量为每kg幼体料加10～15g氯米芬，投喂量为每1000只投喂10～20g加有氯米芬的幼体料，直至变为幼蛙；从而获得雄性蛙四倍体纯系。（7）取步骤（6）的雄性四倍体作为父本，取普通二倍体作为母本，采用回交的方式，获得100%三倍体。