[发明专利]一种基于16O/18O标记的完整糖肽相对定量方法

摘要

本发明公开了一种16O/18O标记完整糖肽的有效定量方法，并提出了消除同位素峰重叠的修正方法。具体是将胰蛋白酶催化生成的同位素16O/18O标记的完整糖肽混合后进样，由生物质谱检测峰强度，再经计算消除同位素峰重叠后，进行相对定量。本发明成功解决了同位素16O/18O标记的完整糖肽在质谱中同位素峰重叠的问题，在两个数量级的动态范围内，取得了良好的线性和较低的变异系数，为完整糖肽的定量提供了有效的修正和计算方法。

主权项

一种基于16O/18O标记的完整糖肽相对定量方法，其特征在于包括步骤：将酶催化生成的C‑末端同位素16O/18O标记的完整糖肽混合后进样，由生物质谱检测峰强度，再经以下式(I)‑式(V)计算，消除同位素峰重叠后，进行相对定量；Ratio1=I0I2+I4-(M2M0)I2-[(M2M0)+(M4M0)-(M2M0)2]I0---(I)]]>Ratio2=I1I3+I5-(M3M1)I3-[(M3M1)+(M5M1)-(M3M1)2]I1---(II)]]>Ratio1′=I1×M0M1I2+I4-(M2M0)I2-[(M2M0)+(M4M0)-(M2M0)2]I0---(III)]]>Ratio2′=I0×M1M0I3+I5-(M3M1)I3-[(M3M1)+(M5M1)-(M3M1)2]I1---(IV)]]>ratio(O16O18)=ratio1+ratio2+ratio1′+ratio2′4---(V)]]>上述公式(I)‑(V)中，表示消除同位素峰重叠后得到的定量结果，即是16O/18O标记完整糖肽的比例；其中I0，I2，I4表示实验测得16O标记肽段，一个16O标记和一个18O标记的肽段，18O标记肽段的单同位素峰的强度值；I1，I3，I5表示分别与I0，I2，I4相距1道尔顿的同位素峰的强度值；M0，M2，M4是相对应的16O标记肽段，一个16O标记和一个18O标记的肽段，18O标记肽段的理论同位素含量的相对值；M1，M3，M5表示分别与M0，M2，M4相距1道尔顿的理论同位素含量的相对值。