[发明专利]一种苯硼酸化亲和色谱固定相的应用

摘要

一种苯硼酸化亲和色谱固定相的应用，本发明涉及一种色谱固定相的应用。本发明要解决现有所用于分离壳寡糖的色谱柱的数量较少，分离效果不理想，难以获得高纯度单一组分壳寡糖的问题。苯硼酸化亲和色谱固定相用于壳寡糖分离，具体过程如下：苯硼酸化亲和色谱固定相用匀浆法填装4.6×150mm不锈钢色谱柱，在亲水色谱模式下分离壳寡糖。本发明制备的苯硼酸化亲和色谱固定相的用于壳寡糖分离。

主权项

1.一种苯硼酸化亲和色谱固定相的应用，其特征在于苯硼酸化亲和色谱固定相用于壳寡糖分离，具体过程如下：苯硼酸化亲和色谱固定相用匀浆法填装4.6×150mm不锈钢色谱柱，在亲水色谱模式下分离壳寡糖；流动相为乙腈和质量百分数为1.8％三乙胺‑磷酸水溶液的混合物，其中乙腈占流动相的体积百分数为75％，质量百分数为1.8％三乙胺‑磷酸水溶液占流动相的体积百分数为25％；流速为1mL/min；柱温：25℃；检测器：示差检测器；所述苯硼酸化亲和色谱固定相是按照以下步骤制备的：一、制备活化后的硅胶：将硅胶加入到体积百分数为10％～30％的盐酸溶液中，然后在温度为100℃～120℃的条件下，回流5h～8h，回流后冷却至室温，再水洗反应后的硅胶直至洗涤液为中性，在温度为100℃～120℃的条件下，将洗涤后的硅胶真空干燥8h～12h，得到活化后的硅胶；所述的硅胶的质量与体积百分数为10％～30％的盐酸溶液的体积比为1g:(20～50)mL；二、制备氯代硅胶：将活化后的硅胶置于圆底烧瓶中，向圆底烧瓶中加入N,N‑二甲基甲酰胺，混合均匀，再向圆底烧瓶中加入γ‑氯丙基三乙氧基硅烷，摇匀并充氮气保护，然后在温度为65℃～145℃的条件下，磁力搅拌反应12h～24h，反应结束，静置至室温，得到反应后的产物A，用离心机以3000r/min～8000r/min的速度，将反应后的产物A离心5min～20min，弃上层清液后，得到分离后的产物A，将分离后的产物A分别用N,N‑二甲基甲酰胺和乙醇各洗涤3次～6次，最后置于温度为30℃～70℃的真空干燥箱中干燥4h～8h，得到氯代硅胶；所述的活化后的硅胶的质量与N,N‑二甲基甲酰胺的体积比为1g:(100～400)mL；所述的活化后的硅胶的质量与γ‑氯丙基三乙氧基硅烷的体积比为1g:(10～40)mL；三、制备苯硼酸化硅胶：将氯代硅胶置于圆底烧瓶中，先向圆底烧瓶中加入溶剂，然后加入3‑氨基苯硼酸，超声混匀后，再加入吡啶，室温下反应4h～8h，反应结束，得到反应后的产物B，用离心机以3000r/min～8000r/min的速度，将反应后的产物B离心5min～20min，弃上层清液后，得到分离后的产物B，将分离后的产物B用洗涤液洗涤2次～6次，最后置于温度为30℃～70℃的真空干燥箱中干燥4h～8h，得到苯硼酸化硅胶，即完成一种用于壳寡糖分离的苯硼酸化亲和色谱固定相的制备方法；所述的氯代硅胶的质量与溶剂的体积比为1g:(100～400)mL；所述的氯代硅胶与3‑氨基苯硼酸的质量比为1:(1～4)；所述的氯代硅胶的质量与吡啶的体积比为1g:(1～4)mL；所述的溶剂为氯仿或四氢呋喃，所述的洗涤液为氯仿或四氢呋喃，且溶剂与洗涤液为同种物质。