[发明专利]一种获得稳定的烟粉虱MED隐种BtTRP基因突变系的方法有效
| 申请号： | 201610417540.9 | 申请日： | 2016-06-12 |
| 公开（公告）号： | CN106047936B | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 吕志创;王原;刘万学;万方浩 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12N15/89 | 分类号： | C12N15/89;A01K67/033 |
| 代理公司： | 11318 北京法思腾知识产权代理有限公司 | 代理人： | 高宇<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 100093 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种获得稳定的烟粉虱MED隐种BtTRP基因突变系的方法。所述方法包括以下步骤：BtTRP基因突变品系的获得、获得亲本F0代、获得杂交F1代、自交F2代；高温胁迫检测，及低温胁迫检测，获得稳定的烟粉虱MED隐种BtTRP基因突变系。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 获得 稳定 烟粉虱 med 隐种 bttrp 基因突变 方法 | ||
【主权项】：
1.一种获得CRISPR/Cas9系统诱导的烟粉虱MED隐种BtTRP基因突变系的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n(1)BtTRP基因突变品系的获得，包括以下步骤：/n(1-1)BtTRP基因sgRNA引物的设计：/n基于烟粉虱MED隐种的BtTRP基因序列，设计sgRNA的靶标位点，引物序列如下：/nMED-F：/nGAAATTAATACGACTCACTATAGGACCAGGAGAGAGGCAAACTCGTTTTAGAGCTAGAAATAGC；/nsgRNA-R：/nAAAAGCACCGACTCGGTGCCACTTTTTCAAGTTGATAACGGACTAGCCTTATTTTAACTTGCTATTTCTAGCTCTAAAAC，/n(1-2)合成BtTRP基因sgRNA，/n(1-3)合成Cas9mRNA，/n(1-4)显微注射，将步骤(1-2)获得的BtTRP基因sgRNA和步骤(1-3)获得的Cas9mRNA混合，摩尔比为2:1，注射至烟粉虱MED隐种红眼期伪蛹，培育获得BtTRP基因突变品系；/n(2)获得亲本F0代；/n(3)获得杂交F1代；/n(4)获得自交F2代；/n(5)高温胁迫检测，及低温胁迫检测，获得稳定的烟粉虱MED隐种BtTRP基因突变系。/n
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