[发明专利]一种测定烟草细胞内K+相对浓度的方法

摘要

本发明涉及一种测定烟草细胞内K+相对浓度的方法，首先利用细胞裂解缓冲液处理烟草叶片，过滤取滤液，离心，保留沉淀，用醋酸铵水溶液悬浮，制备原生质体液；其次准备玻璃电极系统，在K+选择性微电极的前端灌充氢离子液态交换剂，后端灌充电解液；最后进行离子相对浓度测定，将原生质体液滴在盖玻片上，静置使原生质体固定，盖玻片置于测试小室底部，用K+选择性微电极在Z轴方向上，刺破细胞膜，利用电极的瞬间感应分别测定探针在溶液中、接触细胞内液及细胞内外液交流后的电流电压，快速获得细胞质中K+相对浓度，进行样品间的差异比较。采用此方法，安全性高，绿色环保，用时较短，反应灵敏，数据精确，方法简单有效，实用性强。

主权项

1.一种测定烟草细胞内K+相对浓度的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、原生质体的制备取待测烟草叶片，剪成方块状，放进细胞裂解缓冲液中，在28℃，40r/min下摇晃6‑8小时，得到细胞裂解液，过滤细胞裂解液，取滤液；将所得滤液通过水平转头离心机在4℃，100 g下离心2min，离心结束，丢弃上清液，留下沉淀；所得沉淀用醋酸铵水溶液悬浮处理1h，得到原生质体液；步骤二、玻璃电极系统的准备玻璃电极系统采用非损伤微测系统；其中K+选择性微电极前端灌充有20μm的选择性的氢离子液态交换剂，K+选择性微电极后端灌充有1cm 的电解液柱，将电极固定器上的Ag/AgCl丝从电极后面插入，使其与电解液接触；K+选择性微电极在使用前用校正液进行校正；接地参比电极为固体电极；步骤三、离子相对浓度测定在离子浓度测定之前，将经多聚赖氨酸水溶液处理过的盖玻片固定在测试小室的底部，取上述步骤一所得原生质体液滴放在盖玻片的中央，静置5min，原生质体固定在盖玻片上；进行离子浓度测定时，K+选择性微电极在Z轴方向上，刺破细胞膜，离子流上出现第一个离子峰；然后电极将直接接触胞内液，当获得第二个离子峰的时候，所得的电压值，用来代表相对的离子浓度。