[发明专利]一种离子液体均相液液萃取-高效液相色谱法测定甾体激素的方法

摘要

本发明公开了一种建立了离子液体均相液液萃取‑高效液相色谱法测定乳及乳制品中6种甾体激素的分析方法。通过一定浓度的加标回收率实验，优化了离子液体均相液液萃取的条件和高效液相色谱仪的条件。对影响萃取和样品制备条件的因素进行了优化，优化的最佳条件是：70μL离子液体1‑己基‑3‑甲基咪唑四氟硼酸盐离子液体作萃取剂，80μL离子液体1‑己基‑3‑甲基咪唑四氟硼酸盐离子液体作萃取剂，0.3593g/mL的NH4PF6为离子对试剂，萃取10s，离心5min，调节样品溶液的pH值为3.0～5.0，NaCl浓度为7％该方法简便、快速、环保，适合乳及乳制品中6种甾体激素的测定。

主权项

1.一种离子液体均相液液萃取‑高效液相色谱法测定甾体激素的方法，其特征在于：包括以下各步骤：高效液相色谱条件：C18色谱柱，4.6mm*250mm，5μm；流速1.0mL/min；柱温：40℃；进样体积：20μL；检测波长：240nm；流动相A为甲醇，B为水，梯度条件为：0‑2min，45％A；2‑7min，45‑55％A；7‑10min，55‑65％A；10‑13min，65‑90％A；13‑18min，90％A；18‑18.1min，90‑45％A；18.1‑25min，45％A；样品溶液的制备：取5.00mL牛奶样品于50mL聚四氟乙烯的贝克曼离心管中，加入10.00mL 100g/L的NaCl溶液和150μL的磷酸溶液，超声提取5min，‑4℃条件下以15 000r/min离心15min，将上清液转移至另一支50mL聚四氟乙烯的贝克曼离心管中；再加入5.00mL 100g/L的NaCl溶液于残渣内，超声振提取2min，‑4℃条件下以15 000r/min离心15min；合并上清液过0.22μm水相滤膜作为样品溶液；均相微萃取过程：用微量注射器加入70μL离子液体[C6MIM][BF4]于上述样品溶液中，后涡旋振荡约10s，使二者充分混匀，使离子液体全部溶解后形成均一相的溶液；然后加入1.00mL 0.3593g/mL的NH4PF6水溶液，涡旋振荡10s，充分混匀后在‑4℃条件下以15 000r/min离心5.0min，新的疏水性离子液体形成并附着于离心管底部；去除上层水溶液后，加入100μL乙腈，混匀，置于进样瓶的内插管中，通过高效液相色谱仪进行分析，甾体激素为莫美他松糠酸酯，氯氟轻松，孕酮，丙酸睾酮，丙酸诺龙和醋酸羟孕酮。