[发明专利]一种采用紫外线诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法

摘要

本发明公开了一种采用紫外线诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法，包括以下步骤：a）孢子悬浮液制备：取恒温培养箱下培养的平板孢子，震荡后用无菌蒸馏水稀释，即得孢子悬浮液并备用；b）紫外线诱变：取孢子悬浮液置于紫外灯下照射，在避光条件下培养，最后计算致死率；c）菌株筛选：c1)以步骤b中致死率为70%～80%的菌株为基础，挑选其中HC值大于平均值的变异菌株作为初筛菌株，以备复筛；c2)取步骤c1)得到的菌株，接种于含土豆培养基的锥形瓶内，在摇床内培养后通过福林酚法测定酸性蛋白酶酶活力；选取诱变后得到的酶活力大于平均值的变异菌株连续传代6次，得到高产菌株。

主权项

一种采用紫外线诱变的酸性蛋白酶高产菌株选育方法，其特征在于：包括以下步骤：a）孢子悬浮液制备：取恒温培养箱内35℃下培养8 d的平板孢子，用无菌蒸馏水洗脱平板孢子，置于无菌并盛有玻璃珠的三角瓶中，在250～400 r/min的震荡装置上震荡6～10 h，使孢子活化和分散，孢子分散率在95% 以上，在光学显微镜下观察孢子并计数，然后用无菌蒸馏水稀释孢子悬浮液至126 个/mL，即得孢子悬浮液并备用；b）紫外线诱变：取5 mL步骤a）制备得到的孢子悬浮液加入直径为9 cm平皿，将平皿置于距40 W紫外灯25 cm处的磁力搅拌器上，照射时间为35～40 min，稀释并取0.1 mL孢子悬浮液涂布于麦芽汁琼脂培养基平板，整个过程均在红光下进行，然后在35℃避光条件下培养90 h，最后根据平皿菌落数计算致死率；c）菌株筛选：c1)以步骤b中致死率为70%～80%的菌株为基础，挑选其中HC值大于平均值的变异菌株作为初筛菌株，以备复筛，HC值=透明圈直径/菌落直径；c2) 取步骤c1)得到的菌株，接种于含60 mL液体土豆培养基的锥形瓶内，在35℃下300 r/min的摇床内培养90 h，通过福林酚法测定酸性蛋白酶酶活力；选取诱变后得到的酶活力大于平均值的变异菌株连续传代6次，得到高产菌株。