[发明专利]一种基于沸石吸附的抗阿尔兹海默症药物的筛选方法

摘要

本发明公开了一种基于沸石吸附的抗阿尔兹海默症药物的筛选方法，该方法基于沸石的亲和选择‑液质谱筛选，通过将乙酰胆碱酯酶吸附到沸石上，对药用植物提取物中的乙酰胆碱酯酶抑制剂进行筛选。本发明对影响吸附的因素，如:沸石类型、溶液pH值、吸附时间、吸附温度等因素进行了系统优化，并且还对筛选药物的影响因素，如：孵育液pH、孵育液离子强度、孵育液温度、孵育时间等因素进行了系统优化，建立了能高效、正确、灵敏、重复性高的筛选抗阿尔兹海默症成分的方法，具有重要的应用价值。

主权项

1.一种基于沸石吸附的抗阿尔兹海默症药物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)称取延胡索粉末，加入水中，回流提取，得提取液，过滤，得滤液，离心，吸取上清液，得延胡索提取液，备用；(2)将乙酰胆碱酯酶溶解在PBS缓冲液中，加入沸石，加入PBS缓冲液，搅拌，调节溶液的pH值为8.0，在25℃条件下孵育20min，应用物理吸附技术在沸石表面上吸附乙酰胆碱酯酶得到吸附乙酰胆碱酯酶的沸石，然后将未吸附的乙酰胆碱酯酶溶液吸除，得到吸附乙酰胆碱酯酶的沸石；(3)将步骤(1)提取得到的延胡索提取液和步骤(2)得到的吸附乙酰胆碱酯酶的沸石混合，加入PBS缓冲液，使离子强度为10mM，pH值为7.4，37℃孵育20分钟，离心吸出孵育液，加入PBS缓冲液清洗沸石四次，最后加入体积浓度为50％甲醇水溶液洗脱沸石，吸取50％甲醇水溶液洗脱液，进行液质分析；液质分析条件为：4.6mm×150mm，5μm的Kromasil C18柱，流动相：A相为用甲酸调制pH 3.5的10mM醋酸铵溶液，B相为乙腈；梯度洗脱：0min，5％B；5min，15％B；10min，20％B；20min，25％B；30min，100％B；35min，100％B，流速0.6mL·min‑1，柱温30℃，进样体积5μL；液质分析参数：正离子模式，毛细管温度325℃，离子源电压+4.5kV，喷雾气压379.21kPa，去簇电压+60V，加热气压379.21kPa，离子源温度550℃，一级质谱扫描范围m/z 100‑1500，二级质谱激活类型CID。