[发明专利]一种用于肝癌早期诊断的纳米金CT造影剂及其制备方法

摘要

一种用于肝癌早期诊断的纳米金CT造影剂及其制备方法。本发明在纳米金(AuNPs)表面，修饰pH敏感的硫辛酸修饰的N‑二异丙基乙二胺(LA‑N(iPr)2)、硫辛酸聚乙二醇修饰的甘草次酸(LA‑PEG3.5k‑GA)以及连有硫辛酸的聚乙二醇(LA‑PEG2k)，三者物质的量比为n(LA‑N(iPr)2):n(LA‑PEG3.5k‑GA):n(LA‑PEG2k)＝1：1：(3‑5)。该造影剂具有pH敏感的配体可逆屏蔽‑去屏蔽功能，将主动靶向与被动靶向结合，获得较主动靶向更加优异的成像效果。小鼠CT成像实验表明，本造影剂可对荷瘤鼠(小鼠H22肝癌肿瘤)皮下异位瘤与肝癌原位瘤进行CT成像。

主权项

1.一种用于肝癌早期诊断的纳米金CT造影剂的制备方法，其特征在于，该方法的具体步骤如下：第1、纳米金(AuNPs)制备：采用柠檬酸钠还原法，制备纳米金溶液，金元素浓度为0.18mg/mL，纳米金粒径为18‑25nm；第2、硫辛酸修饰的N,N‑二异丙基乙二胺(LA‑N(iPr)2)制备：使用硫辛酸(LA)与N,N‑二异丙基乙二胺，在1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC.HCL)催化下进行酰胺化反应，20‑40℃下反应6‑12小时；反应结束后，使用蒸馏水进行水洗与分液，然后使用无水硫酸钠对二氯甲烷相进行过夜干燥；最后将二氯甲烷旋干，得到黄色固体，即胺分子LA‑N(iPr)2；利用高分辨质谱(ESI‑HRMS)确认其结构；第3、硫辛酸聚乙二醇修饰的甘草次酸LA‑PEG3.5k‑GA制备：采取丁二酰化改性GA，使用二环己基碳二亚胺(DCC)与N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)做催化剂，并取NH2‑PEG3.5k‑OH加入到所述GA、DCC以及NHS的二氯甲烷溶液中，进行酰胺化反应，0℃下搅拌20‑40分钟，20‑40℃下反应两天；将反应混合液在冰乙醚中沉淀，过滤得到白色固体，真空过夜干燥；然后将产物与硫辛酸(LA)进行酯化反应，使用1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC.HCL)与4‑二甲氨基吡啶(DMAP)进行催化，于二氯甲烷溶液中0℃下搅拌20分钟，然后35℃下反应两天；旋干二氯甲烷，固体透析两天，冻干，得到白色粉末；利用核磁共振(NMR)确认其结构；第4、硫辛酸修饰的聚乙二醇LA‑PEG2k的合成：通过酯化反应，制备硫辛酸修饰的聚乙二醇两千(LA‑PEG2k)，并通过核磁共振(NMR)确认了硫辛酸‑聚乙二醇两千(LA‑PEG2k)的结构；以上4步为相互独立的步骤，先后操作顺序可以互换，也可以分别同时进行；第5、纳米金CT造影剂AuNPs@LA‑N(iPr)2,LA‑PEG3.5k‑GA,LA‑PEG2k制备：通过金硫键将第4步制备的硫辛酸‑聚乙二醇两千(LA‑PEG2k)与第2步制备的胺分子LA‑N(iPr)2、第3步制备的靶向配体甘草次酸LA‑PEG3.5k‑GA按照摩尔比为1：1：(3‑5)的比例共同修饰在第1步制备的纳米金(AuNPs)表面，得到AuNPs@LA‑N(iPr)2,LA‑PEG3.5k‑GA,LA‑PEG2k；即纳米金CT造影剂。